Исследования хромосом

Исследо­вания хромосом можно проводить на любых делящихся клет­ках, содержащих ядро. Для визуализации хромосом необходима конденсация хроматинного материала, которая происходит в процессе деления во всех клетках. Цитогенетические исследования обычно проводят на лимфоцитах крови, однако при подо­зрении на мозаицизм рекомендуется исследование фибробластов. С целью пренатальной диагностики исследования хромосом проводят на материале клеток амниотической жидкости, ворсин хориона или крови плода- в случае предымплантационного пренатального диагноза исследуют бластомеры.

Видео: Исследования генома человека (рассказывает биолог Михаил Скоблов)

Кариотипирование — это определение кариотипа, проводимое с помощью фотографического или компьютерного изображения предваритель­но окрашенных хромосом клетки. Клетки культивируют, деление останавливают на стадии метафазы митоза, фиксируют и прокраши­вают. Если необходимо рассмотреть тонкие дета­ли, возможно исследование хромосом в профазе. Поскольку хромосомы в профазе длиннее и менее конденсированы, определяется 600-1200 полосок, в то время как в метафазе на хромосомах обычно видно только 400-600 полосок. Обработка трипси­ном с окрашиванием по Гимзе называется методом G-бэндинга, а акрихин обеспечивает Q-бэндинг (флюоресцентный). Для демонстрации центромер используют специальные методы окрашивания.

Гибридизацию in situ – метод исследования хромосом, который применяют для выявления наличия или отсутствия специфических нуклео­тидных последовательностей ДНК в хромосомных нитях. Молекулярный зонд используют для рас­познавания и гибридизации с гомологичной после­довательностью ДНК на хромосоме, что позволяет идентифицировать определенную хромосому, хро­мосомный участок или последовательность ДНК. Если используется флюоресцентный зонд, то метод исследования хромосом называется FISH.

Видео: Большой скачок ДНК Код жизни

Сравнительная геномная гибридизация — метод молекулярного цитогенетического анализа, по­зволяющий составить одновременно каталог всех хромосом. Исследуемую ДНК изолируют из оди­ночной клетки (и мультиплицируют посредством ПЦР) или из множества клеток пациента и сравни­вают с референтной ДНК, полученной от здорового индивида. Тестируемую и референтную ДНК ме­тят разными флюоресцентными красителями, со­ответственно зеленым и красным флюорохромом, и затем проводят одновременную гибридизацию исследуемой и референтной ДНК с нормальными хромосомами. Флюоресцирующие изображения хромосом позволяют определить соотношения зеленого и красного цвета и таким образом иден­тифицировать избыточный или отсутствующий хромосомный материал.