Лабораторные методы исследования (в педиатрии).
Микроэкспресс-методы.
Методы, позволяющие определять абсолютные количества веществ, измеряемые в микрограммах, относят к категории ультрамикроанализа. При помощи микрометодов исследуют количества порядка миллиграммов [Керк (P. L. Kirk)]. Содержание подавляющего большинства органических и неорганических веществ в крови измеряют в миллиграмм-процентах или в миллиэквивалентах на 1 л, концентрации некоторых биологически активных веществ (кортикостероиды, биогенные амины), а также микроэлементов – в микрограмм-процентах, следовательно, для педиатрической клиники особое значение приобретают методы ультрамикроанализа. Необходимость разработки и внедрения таких методов особенно остро ощущается при патологии у новорожденных и детей раннего возраста, так как взятие крови даже для микроанализа у них не всегда представляется возможным. Микро-экспресс-методы в педиатрии должны удовлетворять тем же требованиям, что и любые аналитические методы: быть точными, доступными, простыми, а также быстро выполнимыми, допускающими проведение серийных анализов. Получение информации тотчас после взятия материала позволяет вносить коррективы в лечение ребенка уже в день его поступления.
Развитие микроэкспресс-методов и ультрамикроанализа начинается с работ отечественных ученых. К. А. Тимирязев ввел в практику научного эксперимента газовый микроэкспресс-метод, намного опередив зарубежных химиков. В 20-х годах был предложен капельный метод анализа, получивший развитие в трудах Н. Тананаева. Новые микроэкспресс-методы разрабатывает в последние годы проф. А. А. Покров-скин. Выполнение ультрамикроанализа связано с определенными техническими трудностями, обусловленными изысканием рациональных методов получения малых, но точно отмеренных объемов сыворотки крови, а также разработкой высокочувствительных колориметрических или других методов. Общепринятые способы взятия крови в обычные конические пробирки для целей микроэкспресс-методов едва ли приемлемы. Существуют следующие варианты взятия капиллярной крови для этих методов: а) получение чистой капли крови после прокола кожи пальца, мочки уха или пятки с последующим заполнением капиллярной микропипетки- б) взятие крови микрошприцем, градуированным в микролитрах- в) взятие крови в U-образный капилляр (после ретракции кровяного сгустка и центрифугирования отрезки капилляра, содержащие сыворотку, обламывают, а сыворотку подвергают анализу)- г) нанесение микроколичеств крови на хроматографическую или фильтровальную бумагу (анализ может быть выполнен после высушивания крови и элюирования исследуемых веществ с бумаги водными или органическими растворителями).
Разрабатываемые в настоящее время микроэкспресс-методы можно разделить на две категории. Простые методы, дающие полуколичественную информацию (применение индикаторных бумажек, карандашей, таблетированных реактивов). Несмотря на невысокую точность, эти методы обладают определенными достоинствами, к которым относятся их простота и скорость выполнения. В практической работе детских лечебных учреждений простые полуколичественные тесты ориентируют врача в отношении основных обменных нарушений. Эти методы находят также применение при массовых обследованиях детских контингентов на выявление наследственной патологии обмена (фенилкетонурии, болезней обмена углеводов и др.). Вторая категория микроэкспресс-методов – так наз. прецизионные методы, из которых наибольшее распространение получили колориметрические, спектрофотометрические и некоторые хроматографические методы, а также методы флюоресцентного анализа. Колориметрические микроэкспресс-методы основаны на измерении интенсивности поглощения света растворами, содержащими исследуемое вещество- повышения чувствительности методов достигают при помощи цветных реакций с определенными соединениями. В настоящее время разработаны колориметрические микроэкспресс-методы, отличающиеся высокой чувствительностью и специфичностью (В. С. Асатиани, 1965). Существенным недостатком измерительных приборов – фотометров, применяемых при биохимическом исследовании, является значительная емкость кюветы, что ограничивает возможность их применения при микроэкспресс-методах.Поэтому сконструированы микрокюветы емкостью 50-200 мкл. Капиллярные микрокюветы Керка, Лаури и других модификаций позволяют значительно увеличить рабочий ход светового луча при малых объемах исследуемого материала. В отечественных биохимических лабораториях находит применение оптическая система проф. А. А. Покровского, в которой также используют капиллярные микрокюветы, устанавливаемые вертикально в аппаратах ФЭК-М, СФ-4, СФ-10. Световой пучок от источника света конденсируется на таких кюветах посредством цилиндрических линз. Существуют также конструкции кювет, в которых с помощью системы зеркал осуществляется многократное прохождение света через исследуемый раствор.
Выполнение аналитических микроэкспресс-методов требует применения специальной химической посуды – автоматических микропипеток, микробюреток, микрошприцев и т. д.
К числу микроэкспресс-методов, нашедших широкое применение в клинике детских болезней, относятся пламенная фотометрия и микрометод Аструпа. Сочетанное применение этих методов позволяет в течение нескольких минут исследовать основные показатели ионограммы и кислотно-щелочного равновесия, что имеет большое значение для распознавания расстройств водно-солевого обмена и проведения дегидратационной терапии, лечения препаратами диуретического действия. Эти методы имеют особо важное значение в работе реанимационных центров, нефрологических отделений, отделений для детей с жел.-киш. заболеваниями. В последние годы стало возможным быстрое получение информации при использовании некоторых хроматографических методов исследования. Широкие перспективы в этом отношении открывает метод хроматографии в тонких слоях адсорбентов: силикагеля, окиси алюминия, гипса и др. (А. А. Ахрем и А. И. Кузнецова, 1965). Разделение большинства химических соединений в тонких слоях происходит в течение короткого времени – 20-30 мин., использование высокочувствительных красителей позволяет выявлять на хромато-грамме количества веществ в диапазоне 1 мкг и даже ниже. Метод тонкослойной хроматографии находит применение в токсикологических лабораториях для быстрого выделения и определения концентраций токсических соединений в крови при случайных бытовых отравлениях. Этот метод обеспечивает быструю информацию о содержании липоидов, моно- и дисахаридов, некоторых аминов в биологических жидкостях.
Автоматизация биохимических методов исследования – другой путь развития микроэкспресс-методов. Аутоанализатор фирмы “Техникон” (США) позволяет выполнить от 20 до 60 исследований в 1 час при минимальных затратах ручного труда [Бюхнер (М. Biichner), 1961]. Созданный в Советском Союзе аппарат “Биан” также обеспечивает автоматизацию ряда лабораторных исследований.
Ю. Вельтищев. (Краткая медицинская энциклопедия)
