Техника приготовления музейных препаратов
В работе патологоанатомических отделений, наряду с микроскопическим исследованием объектов, существенное значение имеет приготовление для демонстрационных и учебных целей музейных препаратов с сохранением их естественной окраски, обусловленной кровяным пигментом.
В 1895 г. Н. Ф. Мельников-Разведенков впервые установил, что после фиксации в формалине возможно восстановить естественную окраску органа, обрабатывая препарат спиртом. На этом принципе основаны наиболее распространенные в настоящее время методы приготовления музейных препаратов. Обработка органов распадается на следующие три фазы:
- Фиксация в формалино-солевой смеси, в которой гемоглобин крови переходит в метгемоглобин, благодаря чему органы принимают бурую окраску.
- Восстановление естественной окраски препарата в спирте вследствие перехода метгемоглобина в нейтральный гематин (катгемоглобин), весьма сходный по цвету с оксигемоглобином.
- Окончательное хранение препарата в глицериновой смеси.
ФИКСАЦИЯ
Формалино-солевые растворы, предложенные целым рядом авторов, различны по своему составу, и показания к применению той или иной жидкости определяются качеством объекта и задачами, которые поставлены при изготовлении препарата.
Наиболее употребительны следующие фиксирующие смеси.
II. Ф. М е л ь н и к о в а-Р а з в е д е н к о в а:
Формалин 100 мл
Хлористый калий.. 5 г
Уксуснокислый калий (или натрий) 30 »
Вода 1000 мл
Видео: Изготовления лекарств в условиях аптеки
- К а й з е р л и н г а:
Формалин 200 мл
Азотнокислый калий (селитра) 15 г
Уксуснокислый калий 30 »
Вода.. 1000 мл
- Пика:
Формалин 50 мл
Карлобадская соль (искусственная) 50 г
Вода 1000 мл
- И о р е с а:
Формалин 100 мл Сернокислый натрий 20 г
Сернокислая магнезия 20 »
Поваренная соль 10 »
Вода. 900 мл
Для приготовления указанных жидкостей берется водопроводная вода.
Общим для всех формалино-солевых растворов является то, что они замедляют уплотнение препарата и сохраняют на более продолжительное время способность тканей к восстановлению окраски.
В выборе той или иной фиксирующей жидкости следует руководствоваться тем, что слабые (по концентрации формалина) растворы обладают более глубоким проникающим действием и поэтому они лучше для фиксации крупных объектов, но так как гемолизирующее действие таких растворов выше, они менее эффективны в отношении восстановления естественной окраски. С последней точки зрения выгоднее крепкие формалиновые жидкости. Поэтому там, где главной задачей является сохранение окраски препарата, последний фиксируют в жидкости Кайзерлинга, как наиболее крепкой и, следовательно, с наименьшим гемолизирующим действием. В тех же случаях, когда такая окраска имеет второстепенное значение и орган крупный, показаны слабые фиксаторы, как, например, жидкости Н. Ф. Мельникова-Разведенкова, Пика и др. Впрочем, в отношении крупных объектов одно лишь применение слабых формалино-солевых жидкостей ни в какой мере не обеспечивает полноценной фиксации и потому, как правило, перед погружением препаратов в фиксирующий раствор приходится прибегать к дополнительным разрезам, надрезам и вколам. Надрезы и вколы делают в малозаметных местах органа, не подлежащих демонстрации- в разрезы и вколы вводят тонкие ватные или марлевые тампоны. Однако и разрезы далеко не всегда гарантируют хорошую фиксацию всей тканевой массы большого объекта, по этой причине иногда ограничиваются только частью органа, в виде пластин или ломтей той или иной толщины. Приготовление таких пластин показано и при затруднениях в посуде и фиксирующих средствах- пользуясь пластинами можно шире применять жидкость Кайзерлинга, что, как уже было отмечено выше, является более выгодным для сохранения естественной окраски препарата.
Наряду с разрезами, для сохранения крупных объектов и, главным образом, их внешнего вида прибегают также к впрыскиванию (при помощи шприца) фиксирующего раствора в толщу органа. Такое впрыскивание делают на целом органе при сохраненной капсуле и притом как до помещения препарата в фиксатор, так и после, спустя несколько дней. Должно заметить, что впрыскивание фиксатора в толщу органа не всегда надежно в смысле полной фиксации глубоко расположенных тканей. В этом отношении гораздо более эффективно введение фиксирующей жидкости в сосуды. Фиксация через сосуды, будучи непригодна в обычной музейной практике (по причине вымывания крови и обесцвечивания органа), все же может быть рекомендована в отдельных случаях, а именно: 1) когда нужно сохранить всю тканевую массу объекта, а не окраску его и 2) при некоторых патологических пигментациях (угольной, малярийной). По понятным причинам никаких разрезов на препарате при наливке сосудов делать нельзя, они допускаются лишь после того, как налитый орган пробыл в фиксаторе 2—3 дня. Сосуд, через который вводилась фиксирующая жидкость, перевязывают. Вводить жидкость лучше всего через артерии, по можно и через вены, лишь бы они были проходимы и не содержали кровяных свертков- орган при этом заметно набухает. Количество вводимой в сосуды жидкости должно быть приблизительно равно весу того органа, который подвергается обработке.
Для наливки пользуются большими шприцами Жанэ (можно воспользоваться и воронкой, по принципу сифона).
Для сохранения внешнего вида больших объектов иногда прибегают и к удалению центральных, а потому плохо фиксирующихся участков органа путем выскабливания (острой ложкой) через широкое окно, сделанное на стороне препарата, не подлежащей демонстрации. Такое выскабливание, как правило, делают после того, как препарат пролежал в фиксирующей жидкости не менее 3—5 дней. Образовавшуюся полость заполняют сухой ватой, а затем орган вновь помещают в фиксирующую жидкость, добиваясь хорошей фиксации сохранившегося периферического слоя.
Богатые кровью органы, в целях наиболее полного восстановления окраски, желательно фиксировать в крепких формалино-солевых растворах.
Первое и основное правило при изготовлении музейных препаратов— это избегать всякого обмывания органов водой.
Перед тем, как поместить препарат в фиксирующую среду, его необходимо соответствующим образом подготовить.
- Объект тщательно препарируют, удаляя все лишнее и максимально отчетливо выявляя детали патологического процесса- делают разрезы и придают желательное для демонстрации положение.
Качество наливки органа будет выше, если фиксатор вводить попеременно сначала через один сосуд (артерию), потом через другой (вену).
Видео: Современное фармацевтическое производство
- Различные полости, трубчатые образовании, каналы и свищи заполняют сухой ватой, а где нужно ставят деревянные или стеклянные распорки.
- Куски кожи, вскрытые петли кишок, желудок, сальник, твердую мозговую оболочку аккуратно расправляют, растягивают на толстом картоне или фанере и закрепляют с помощью лигатур или игл.
Только после такой подготовки препарат помещают в фиксирующую жидкость. Надо помнить, что нельзя делать никаких сколько-нибудь значительных исправлений в препарате после того, как он пробыл в фиксаторе хотя бы 1—2 дня.
Для достижения хороших результатов фиксации необходимо соблюдать следующие условия:
Видео: Flumed Farm производство лекарственных препаратов
- Объем фиксирующей жидкости должен в 5—10 раз превышать объем препарата.
- Нельзя допускать контакта фиксируемых препаратов со стенками посуды, а потому их обязательно кладут на вату, изолируя при этом и от боковых стенок.
- Препарат должен лежать в жидкости совершенно свободно. Если в одну и ту же посуду приходится помещать сразу несколько объектов, их обязательно перекладывают ватой и располагают таким образом, чтобы они не оказывали друг на друга значительного давления.
- Препараты, всплывающие на поверхность жидкости, покрывают ватой или сложенной в несколько слоев марлей, которые предварительно смачивают фиксирующей жидкостью.
- Фиксирующая жидкость должна быть совершенно прозрачной- при окрашивании кровью, помутнении и загрязнении ее заменяют свежей.
Через 1—2 дня после пребывания препарата в фиксаторе можно извлекать все посторонние предметы, введенные в полости, каналы и трубчатые образования.
Время пребывания препаратов в формалино-солевом растворе весьма различно и зависит от многих условий: величины и плотности объекта, количества и глубины сделанных разрезов и надрезов, свежести и крепости фиксатора, температуры. Различные тонкостенные органы, как, например, петли кишок, желудок, желчный и мочевой пузыри, достаточно держать в жидкости 12—24 часа- такие органы как почки, сердце, легкие и селезенка (нормальных размеров или немного увеличенные и обязательно разрезанные) —от 3—4 и до 7 дней- мозг и печень (с разрезами)—до 3—4 недель. Для того, чтобы препарат не задерживался излишне долго в фиксирующей среде, необходим постоянный контроль за ходом фиксации. Критерием достаточной фиксации служит равномерное уплотнение объекта и отсутствие на контрольном разрезе красноватых и розовых участков- с поверхности разреза не должно выдавливаться кровянистой жидкости. Передержка препарата в фиксаторе может в дальнейшем неблагоприятно отразиться на качестве восстановления окраски.
Нет никакой необходимости готовить разные формалиновые жидкости, достаточно держать в лаборатории один какой-нибудь фиксатор и притом лучше всего Кайзерлинга или Н. Ф. Мельникова-Разведенкова. Смотря по обстоятельствам, фиксатор И. Ф. Мельникова-Разведенкова можно сделать более крепким, добавляя в него по мере надобности соответствующее количество чистого формалина, а фиксатор Кайзерлинга, наоборот, слабее, разводя его одним солевым раствором.
Вся работа с фиксирующими средами должна проводиться или в секционной комнате, или в отдельном хорошо проветриваемом помещении. Посуда, в которой хранятся препараты, покрывается простым стеклом соответствующих размеров. Желательная температура помещения около 18°. Во избежание химической травмы рук, работают в резиновых перчатках.
Говоря об общих принципах обработки препаратов в фиксирующих жидкостях, нельзя не коснуться некоторых деталей такой обработки, а главное разрезов в отношении некоторых органов.
Замечания по разрезам и фиксации некоторых органов. Головной мозг — целиком сохраняют редко по причине его длительной фиксации (до 3—4 недель). Если все же возникает такая необходимость, то для обеспечения лучших условий фиксации вскрывают боковые желудочки (через мозолистое тело) и делают глубокие надрезы в малозаметных местах.
Значительно чаще готовят препараты из отдельных ломтей (пластин) головного мозга, которые получают при некоторых классических способах вскрытия, как например: при горизонтальных разрезах по Флексигу и фронтальных — по Питре и Фишеру. Такие пластины фиксируются в короткие сроки.
Можно также делать разрезы и вырезать пластины, исходя из соображений наибольшей демонстративности патологического фокуса.
Для лучшей сохранности патологического очага головной мозг иногда целиком помещают в фиксатор и разрезают лишь спустя несколько дней после того, как вещество мозга достаточно уплотнится.
В тех случаях, когда сохранность естественной окраски мозга не имеет существенного значения, очень хорошие результаты дает наливка сосудов фиксирующей жидкостью. Фиксатор наливают через общие сонные артерии за сутки до вскрытия трупа, примерно по 600—700 мл жидкости с каждой стороны, артерии после этого перевязывают. При вскрытии трупа заметно оплотневший мозг извлекают и помещают в фиксирующую жидкость еще на 1-2 недели, предварительно вскрывая боковые желудочки (через мозолистое тело). По истечении указанного срока орган, если нужно, разрезают.
Непригоден для приготовления музейных препаратов метод вскрытия головного мозга по Вирхову.
Спинной мозг. Вскрывают по задней поверхности твердую мозговую оболочку. Никаких специальных разрезов собственно вещества мозга не делают, за исключением тех, которые необходимы для выявления и демонстрации патологического процесса.
Перед погружением в фиксатор препарат предварительно раскладывают па картоне или тонкой дощечке, тщательно расправляют вскрытую твердую оболочку и укрепляют ее при помощи игол или лигатур. Продолжительность фиксации 1-2 дня.
Сердце. Для приготовления музейных препаратов пользуются различными разрезами. Так, если желательно сохранить только внешний вид органа, то ограничиваются одними боковыми разрезами, соединяющими предсердие и желудочек с каждой стороны. Для показа поражений клапанного аппарата и пристеночного эндокарда хороши разрезы, производимые, обычно, на вскрытии (начиная от правого предсердия и дальше по току крови).* Для демонстрации полостей желудочков, толщины их стенок и особенно клапанных отверстий пользуются поперечными разрезами сердца на различных уровнях.
Наконец, в отдельных случаях, главным образом при инфарктах и обширных рубцовых изменениях, можно ограничиться приготовлением препаратов только из крупных участков мышечной стенки сердца (чаще всего левого желудочка).
*Подробности таких разрезов сердца можно найти в любом пособии по технике вскрытия трупов.
Видео: Производство лекарственных препаратов
Полости сердца и различные аневризматические выпячивания его стенок перед фиксацией заполняют сухой ватой.
Сроки фиксации от 3—4 и до 7—8 дней, смотря по толщине стенок желудочков.
Легкие. Пользуются теми же разрезами, что и па вскрытии, а именно — по длиннику органа, от наружной выпуклой поверхности и до ворот легкого. Направление разреза должно быть таким, чтобы крупные бронхи и сосуды вблизи корня легкого были, по возможности, разрезаны вдоль. При наличии обширных очагов уплотнения (воспалительного и опухолевого характера) делают дополнительные разрезы или иссекают пластины различной толщины (3—4—5 см), то и другое — параллельно вышеописанному основному разрезу.
Хорошие результаты дает фиксация органа (целого легкого или одной доли) посредством вливания фиксирующей жидкости (при помощи шприца Жанэ) в дыхательные пути. Этот способ особенно показан тогда, когда желательно избежать излишнего спадения легочной ткани, как например, при эмфиземе. Фиксатор
(лучше более слабый) вливают осторожно, под небольшим давлением, до умеренного растяжения органа- после этого перевязывают бронх и помещают препарат в формалино-солевой раствор. Разрезы на таком легком делают, если это необходимо, через 2—3 дня после пребывания препарата в жидкости.
Сроки фиксации различны: для объектов с воздушной паренхимой (при наличии разрезов) достаточно нескольких дней, при всякого рода уплотнениях — до 7—10 дней.
Принимая во внимание богатство легочной ткани кровью, для этого органа особенно показана фиксация в жидкости Кайзерлинга.
Желудочно-кишечный тракт. Для приготовления музейных препаратов пользуются теми же разрезами, что и на вскрытии, т. е. пищевод вскрывают по задней стенке, желудок — по большой кривизне, тонкий кишечник — вблизи места прикрепления к брыжейке, толстую кишку — по одной из продольных лент (taenia). Иссеченный отдел желудочно-кишечного тракта, после сосоответствующей препаровки, кладут на тонкую дощечку (или кусок картона), расправляют, несколько растягивают, укрепляют лигатурами (или иглами) и в таком виде помещают в фиксирующую среду.
Для демонстрации различных воспалительных поражений или расстройств кровообращения (полнокровие, кровоизлияния) достаточно выдержать препарат в фиксаторе 6—12 часов (практически оставляют на ночь). Только при новообразовательных процессах (особенно в желудке) сроки фиксации приходится иногда удлинять, а при слишком массивных новообразованиях прибегать и к дополнительным разрезам (через новообразование).
Если желательно сохранить конгломерат невскрытых петель кишок, как, например, при гангрене, то поступают следующим образом: вначале через один из концов кишки промывают весь комплекс петель солевым раствором (входящим в состав какой- либо фиксирующей жидкости), затем один конец перевязывают, а через другой — наливают фиксатор. Перевязывают оставшийся открытым конец кишки и в таком виде препарат помещают в фиксирующую среду на 12—24 часа.
Печень. Для этого органа чаще всего пользуются поперечным разрезом через обе доли от выпуклой поверхности их и до ворот органа на нижней поверхности- разрез не должен быть рассекающим. При сильно уменьшенных размерах печени (бурая атрофия, атрофический цирроз) иногда бывает вполне достаточно одного такого разреза. В большинстве же случаев, помимо такого основного разреза, требуются дополнительные надрезы и вколы в малозаметных местах и тем многочисленнее и глубже, чем крупнее орган. В том случае, когда размеры препарата очень велики (гипертрофический цирроз, злокачественное новообразование) пли имеют место какие-нибудь другие ограничения (в посуде, в фиксирующих средствах), пользуются отдельными ломтями и пластинами. Направление разрезов при этом может быть двоякое: либо продольное, либо поперечное (через выпуклые поверхности долей). Толщина пластин 3—4 см и более.
Если важно сохранить внешний вид органа и желательно избежать разрезов, то применяют или выскабливание глубоко расположенных и плохо фиксирующихся участков ткани или впрыскивание фиксатора в толщу органа.
В заключение нужно заметить, что препараты печени с течением времени приводят к окрашиванию фиксирующих сред желчными пигментами. Предложенный в 1955 г. Мартином (Martin) хлористый кальций, с целью ослабления такого окрашивания, не дает эффекта.
Во избежание сильного закрашивания фиксирующих жидкостей желчный пузырь, как правило, удаляют.
Поджелудочная железа. Для сохранения этого органа обычно ограничиваются одним разрезом (не рассекающим) по длиннику его. Можно делать и любые другие разрезы, если это представляется выгодным для демонстрации патологически измененных участков железы.
Фиксация в течение 1—2 дней, смотря по толщине и плотности препарата.
Селезенка. В большинстве случаев орган разрезают по длиннику, по средней линии, от выпуклой поверхности и до ворот его- разрез не должен быть рассекающим. Когда размеры органа невелики и толщина его не превышает 2,5 см, то, для обеспечения хорошей фиксации, достаточно одного такого разреза. При всяком сколько-нибудь значительном увеличении селезенки желательны дополнительные разрезы, которые лучше делать параллельно основному, срединному разрезу, на расстоянии 2—3 см один от другого и также от выпуклой поверхности. Кроме параллельных продольных разрезов делают и другие — в малозаметных местах. Наконец, при больших размерах селезенки и достаточной плотности ее, можно вырезать отдельные пластины по длиннику органа, толщиной до 3—4 см и более.
Желая сохранить лишь внешний вид препарата, поступают точно так же, как это было рекомендовано для печени (см. стр. 277).
Не рекомендуется делать разрезы на свежем органе в случае его большой дряблости. Такой орган лучше вначале уплотнить, помещая в какой-нибудь слабый фиксатор.
Сроки фиксации препаратов селезенки весьма различны и зависят от размеров органа, плотности ткани и разрезов.
Почки. Для музейных препаратов почки, почти как правило, разрезают во фронтальной плоскости от выпуклой поверхности и по направлению к воротам органа. Полученные в результате такого разреза части (половины) должны держаться только на лоханке. Препарат фиксируют в развернутом виде. Если имеют в виду одновременно демонстрировать и выпуклую поверхность органа, и поверхность разреза его, то орган полностью разделяют на две половины, разрезая и лоханку.
Примерные сроки фиксации при нормальных и немного увеличенных размерах органа составляют 3—5 дней.
Мочевой пузырь. Вскрывают по передней стенке (от шейки и до дна), вскрытую полость заполняют сухой ватой.
При наличии дивертикулов в стенке пузыря их также аккуратно заполняют ватой.
У мужчин мочевой пузырь следует брать вместе с предстательной железой.
В случае значительного увеличения простаты на последней делается глубокий продольный разрез, а при необходимости и боковые.
Для фиксации собственно пузыря (без предстательной железы) достаточно 1-го дня.
Матка. Пользуются теми же разрезами, что и на вскрытии, т. е. вначале вскрывают ножницами полость матки по передней стенке, начиная от шейки и до самого дна- здесь, поворачивая ножницы сначала в одну, а затем в другую сторону, делают добавочные разрезы передней стенки в направлении к фаллопиевым трубам. Вскрытую полость матки заполняют сухой ватой.
При наличии атрофии и гипоплазии матки можно отказаться от всяких разрезов.
Если имеются узлы фибромиомы, их рассекают в желательном направлении, учитывая выгоды демонстрации. В случае инфильтрирующих злокачественных новообразований, распространяющихся на околоматочную клетчатку и соседние органы, делают дополнительные разрезы через ткань новообразования, максимально щадя орган и не нанося большого ущерба демонстративности препарата. При очень больших новообразовательных процессах, когда доступ к матке крайне затруднен, прибегают к рассекающим продольным разрезам, ориентируясь на среднюю часть матки.
Матка как музейный препарат берется, по возможности, вместе с придатками. Яичники в таком случае разрезают по выпуклой поверхности.
Яичники. Приготовление музейных препаратов яичников чаще всего связано с различными новообразованиями (кистозного или солидного характера). Если размеры таких новообразований не велики, то их стремятся обрабатывать в комплексе с маткой и се придатками.
При больших новообразованиях яичника приготовление препаратов нередко приходится ограничивать только ими одними. С последними в таком случае поступают как со всяким большим органом, т. е. делают разрезы, впрыскивают фиксирующую жидкость в толщу новообразования или, наконец, вырезают пл-астины. Кистозные новообразования и отдельные кисты, перед тем как их разрезать, рекомендуется предварительно выдержать в течение 1—2 дней в фиксирующей жидкости во избежание спадения тонкостенных полостей.
Отдельные кисты, если они не содержат сосочковых разрастаний, подлежащих демонстрации, можно заполнять сухой ватой, а на стенки накладывать швы.
Щитовидная железа. Музейные препараты этого органа готовят обычно при его увеличении (зобе). Показаны продольные разрезы долей и притом лучше фронтальные. В случаях очень большого увеличения органа делают дополнительные разрезы и надрезы. Если препарат берется из трупа, то он, как правило, иссекается и затем монтируется вместе с частью гортани и трахеи. Помимо внешнего вида органа, желательно демонстрировать и характер его ткани, для чего части одной из разрезанных долей либо широко разводят, вставляя распорки, либо срезают тонкий ломоть с передней поверхности одной из долей.
Сроки фиксации определяются величиной препарата, разрезами и плотностью ткани.
