Выделение хламидий - хламидийная инфекция в акушерстве и гинекологии
Видео: Хламидиоз у женщин симптомы
Выделение хламидий в культуре клеток
Для взятия материала используются специально предназначенные тампоны - отдельно для уретры и цервикального канала. Материал помещается в пробирку с транспортной средой. Пробирки и среды, не предназначенные для транспортировки образцов, могут быть токсичными для клеток, а это может привести к ложноотрицательному результату. Транспортную среду можно хранить при комнатной температуре 1 день, при 4°С -месяц, при -20°С - 4 месяца.
Взятый материал следует сохранять при 4-6°С и в течение 24 часов направить в лабораторию, обложив пробы льдом. Исследование требует сохранения живых хламидий, поэтому важно соблюдать температурный режим доставки материала.
Используются клеточные линии McCoy, L-929, HeLa-920. Линии клеток пересевают обычно через 5-7 дней, на 3-4 сутки меняют среду. Клетки со стекла снимают раствором версена или трипсина (0,02% и 0,25% соответственно). Суспензию клеток для выращивания монослоя на покровном стекле готовят густотой 2,0x10 и вносят ее в плоскодонные пробирки с помещенным на дно покровным стеклом. Можно применять для этой цели пластиковые микропанели с плоскодонными лунками. Монослой формируют в вертикальном положении пробирок при 37°С в течение 24 часов.
После удаления питательной среды выращенные клетки заражают инфекционным материалом из транспортной среды в объеме 0,5 мл и центрифугируют в центрифуге с горизонтальным ротором при 2500 об./мин в течение 1 часа. После этого инокулят удаляют, в пробирки или лунки вносят поддерживающую среду 199 с 5% сыворотки крупного рогатого скота или сыворотки плодов коров, 5% раствора глюкозы. 0,9-1,0 мкг/мл циклогексимида, а также антибиотики (100 мкг/мл гентамицина, 100 мкг/мл ванкомицина и 25 мкг/мл амфотерицина В).
Через 48 часов после заражения покровные стекла с монослоем извлекают из пробирок, подсушивают на воздухе и фиксируют в холодном ацетоне. Дальнейшие действия полностью соответствуют обработке препаратов для прямая иммунофлюоресценция.
Просмотр препаратов в люминесцентном микроскопе дает возможность увидеть ярко-зеленые внутриклеточные микроколонии хламидий на оранжевом фоне цитоплазмы.
При малом количестве элементарные тельца в исследуемом материале срок инкубации зараженных культур увеличивают до 3-5 дней, в некоторых случаях производят пассажи, т. е. заражение свежих культур жидкой фазой и клетками первичной культуры. Диагностические лаборатории редко используют пассажи из-за чрезмерного затягивания в выдаче ответа.
Метод выделения С. trachomatis в культурах клеток высоко чувствителен и специфичен, только он позволяет обнаружить жизнеспособных возбудителей. Однако и этот метод в 10-15% случаев может дать ложно-отрицательный ответ.
Результат анализа выдается через 5-7 дней. Варианты выдачи ответа при культуральной диагностике: "Культуральным методом выделены С. trachomatis", "Культуральным методом С. trachomatis не выделены", "Исследование повторить из-за цитопатического действия".
