Серологические методы - хламидийная инфекция в акушерстве и гинекологии
Ранее применявшиеся реакция связывания комплемента и реакция пассивной гемагглютинации в настоящее время почти забыты. Более распространена реакция микроиммунофлюоресценции (реакция микроиммунофлюоресценции). Технически она трудоемка, т. к. основана на использовании непрямого варианта иммунофлюоресценции. Для ее постановки на предметное стекло наносят ряд капель, содержащих элементарные тельца хламидий из культуры в желточных мешках куриных эмбрионов.Препарат высушивают и на каждую из капель элементарные тельца наносят разведения исследуемой сыворотки (от 1:8 до 1:1024). Далее после отмывки не связавшихся антител наносят меченную ФИТЦ антиглобулиновую сыворотку против белков сыворотки человека. Последующий ход исследования обычен для реакций иммуно-флюоресценции, учет в люминесцентном микроскопе по предельному разведению сыворотки, дающему люминесценцию элементарные тельца.
В настоящее время широко используются иммуноферментные методы выявления антител к С. trachomatis с дифференинровкой иммуноглобулинов G. М. А. В качестве антигенов используются рекомбинантные липополисахариды.
Серологические методы помогают в ряде случаев определить стадию и характер течения заболевания. Это особенно важно при восходящей и персистирующей инфекции, которая поддерживает хроническое течение болезни на протяжении нескольких месяцев и даже лет и тем самым повреждает или разрушает ткани и органы.
В основе данных методов лежит выявление специфических антител. которые накапливаются в сыворотке крови и в секретах инфицированного органа в ответ на внедрение возбудителя. Антитела относятся к трем классам иммуноглобулиновых молекул: М, А и G. Накопление антител каждого из этих классов происходит через разные промежутки времени, что зависит от характера инфицирования (первичное или повторное). При первичном инфицировании сначала появляются антитела класса М. затем - G и в последнюю очередь - А. По мере угасания иммунного ответа снижение концентрации титра антител каждого класса происходит в той же последовательности. Иммунный ответ при повторном проникновении возбудителя характеризуется быстрым нарастанием титра антител G и А и практически полным отсутствием антител класса М.
Таким образом, при остром инфекционном процессе у пациентов можно обнаружить антитела класса М или быстро нарастающие количества антител классов G и А. Напротив, при хронически протекающих заболеваниях выявляются специфические антитела классов G и А, концентрации которых fie изменяются на протяжении длительного периода. В ряде случаев (в 3%) при хронически протекающих заболеваниях, прежде чем образуются антитела класса G. в течение нескольких недель регистрируются невысокие титры антител класса А (<1/8). При бессимптомном течении заболевания определение антител класса А в постоянно низких титрах на протяжении многих недель говорит о микробной персистенции. Низкие (< 1/64), не меняющиеся во времени титры специфических антител класса G указывают на давно перенесенную хлам иди иную инфекцию. При острых формах заболевания диагностическое значение имеет обнаружение хламидийных IgM, IgA антител либо установление сероконверсии IgG (нарастание титров антител в 4 и более раз).
Для того чтобы оценить динамику изменений титров антител различных классов, в клинике часто используют метод парных сывороток, т. е. производят повторное определение антител с интервалом 2-3 недели. На основании сравнения результатов при первом и втором обследовании делают заключение о характере и стадии заболевания (таблица 1).
Таблица I Серологическое определение стадии заболевания
Стадия заболевания | Определяемые антитела | Динамика титров антител |
Острая | IgM. IgG. IgA | Быстрое изменение (нарастание более чем в 4 раза) |
Хроническая | IgG. IgA | Титры постоянные |
Реактивация / реинфекция | IgG, IgA | Быстрое изменение (нарастание более чем в 4 раза) |
В настоящее время сделаны попытки определения местных секреторных антител к С. trachomatis в цервикальных секретах, однако вывод о диагностическом их значении следует делать с большой осторожностью.
Следует отметить, что даже в условиях, когда лаборатория работает квалифицированно, результат исследования зависит от того, как был взят материал, как он хранился, ставятся ли одновременно необходимые контроля, исключающие неправильно взятые пробы. Приводим таблицу, удачно систематизирующую достоинства и недостатки методов обнаружения С. trachomatis (таблица 2).
Таблица 2 Достоинства и недостатки различных методов обнаружения С. trachomatis
(Taylor-Robinson D. and Thomas В. I., 1991)
прямая иммунофлюоресценция | Культура клеток | ИФА | полимеразная цепная реакция | |
Участки тела, которые можно обследовать | Любые | Большинство | Ограничения из-за неспецифичности реакций | Любые |
Значение правильности взятия проб | Решающее | Решающее | Решающее | Решающее |
Условия транспортировки проб | Если препарат фиксирован, условия не важны | Быстрая доставка или хранение при низкой температуре | Не имеет значения, если проба взята в буферный раствор | Быстрая доставка пли хранение при низкой температуре. Менее важны, чем для культуры клеток |
Условия хранения | На короткое время при +4°. на длительное при -20°С | +4°С - сутки Длительное хранение в жидком а юте | 3-5 дней при +4°С. Замораживание снижает чувствительность | На короткое время -при +4°С, на длительное - в жидком азоте |
Проверка адекватности взятии материала | Мазки оценивают во время тестирования | Не практикуется | Не практикуется | Определяется, присутствует ли ДНК |
Потребность в | Люминесцентный микроскоп | Центрифуга, | Комплект для ИФА | Амплификатор, оборудование для электрофореза и др., для полимеразная цепная реакция-анализа |
Обработка проб | Простая | Трудоемкая | Становится | Требует строгой предосторожности, чтобы не конгаминировать |
Чтение теста | С объективное и утомительное | Субьективное, умеренно утомительное | Объективное. | Объективное, простое |
Время выполнения | 30 минут | 12-72 часа | 3 часа | 12-24 часа |
Способы проверки результата | Повторный просмотр | Повторный про | Повторение теста | Повторная проба или переваривание эндонуклеазой |
Результат зависит от | Опыта микроскописта | Чувствительности клеточной культуры | Присущей мощности теста | Хорошею контроля и отсутствия контаминации |
Использование как контроля лечения | Ограничено | Рекомендуется | Ограничено | Не практикуется |
Способность к поддержанию штамма | Нет | Да | Нет | Нет |
Изложенное позволяет сделать следующее заключение о лабораторных методах диагностики генитального хламидиоза: надежными способами установления диагноза являются те, которые направлены на выявление возбудителя, его антигенов или генома. Серологические методы следует считать вспомогательными.
