Методические аспекты диагностики урогенитального хламидиоза

Материалом для исследования на присутствие хламидий в образцах могут быть соскобы эпителиальных клеток из уретры и цервикального канала, секрет предстательной железы, эякулят, моча, соскобы с конъюнктивы глаза и задней стенки глотки.

Забор исследуемого материала производится в пластиковые стерильные пробирки типа «Эппендорф» одноразовым стерильным зондом, на одном конце которого находится ватный тампон, либо синтетические ворсинки, обладающие повышенными сорбционными свойствами, либо специальной щеточкой cervex-brush или voba-brush. Учитывая особенности тропизма хламидий к цилиндрическому эпителию, забор материала берут на глубине 1,5-2 см. у женщин в цервикальном канале и уретре, у мужчин в передней уретре, ближе к ладьевидной ямке на глубине 3-4 см у мужчин. Соскоб эпителиальных клеток из забранных мест помещают в пробирку, заполненную стерильным физиологическим раствором. Биологический материал помещают до исследования в холодильник при температуре +4°С

Методика забора эпителиального соскоба из уретры мужчин. Головку полового члена в области наружного отверстия уретры обрабатывают ватным тампоном, смоченным в физиологическом растворе. При наличии обильных выделений первая капля, содержащая слизь и лейкоциты удаляется. При скудных выделениях или их отсутствий проводят массаж уретры. Затем освобождается головка полового члена от крайней плоти методом смещения последней в сторону корня полового члена. Пациент сам фиксирует руками половой член в области венечной борозды 1-м и 3-м пальцами, вытягивая член слегка вперед, а указательными пальцами слегка разводит губки уретры. Такая фиксация полового члена позволяет с наименьшей травматизацией ввести зонд в уретру. Далее вводят зонд на глубину 3-4 см и вращательными движениями собирают эпителий со слизистой уретры.

После забора материала зонд опускают в пластиковую пробирку, содержащую 300 мкл стерильного физиологического раствора, тщательно перемешивают, остатки жидкости на зонде отжимают о стенки пробирки, зонд извлекают и выбрасывают в контейнер с дезинфицирующим раствором.

Методика забора секрета предстательной железы.

При заборе секрета простаты рекомендуется половое воздержание в течение 2-х суток до исследования. Забор сока простаты производится сразу после мочеиспускания и удаления последней капли мочи из канала сухой стерильной салфеткой. Головка полового члена освобождается от крайней плоти. Забор секрета выполняется по классической методике с помощью трансректального массажа железы. Пациент принимает коленно-локтевое положение. Указательный палец правой руки в перчатке или презервативе, смазанном вазелином вводиться в ампулу прямой кишки, пациент при этом натуживается как при акте дефекации. Достигнув пальцем предстательной железы, врач предлагает пациенту расслабиться. В таком положении проводится массаж железы: поочередно надавливая на левую и правую доли железы в течение 5-10 секунд, выполняя движение по восьмерке 2-3 раза. Этого достаточно для отхождения секрета железы. При отсутствии капли из канала, делалось дополнительно два или три массажных движения в глубине промежности у корня полового члена, избегая при этом массажировать саму уретру. Такой способ забора исключает контаминацию секрета предстательной железы уретральным содержимым. После окончания массажа предстательной железы сок в виде свободно стекающей капли собирают в одноразовую пробирку типа "Эппендорф».

Забор первой порции утренней мочи. Достаточно информативным является исследование у мужчин осадка первой порции утренней мочиметодом полимеразной цепной реакции (ПЦР), особенно в случае затруднения в сборе секрета предстательной железы. Для анализа отбирается первая порция утренней мочи в количестве 10-50 мл в специальный флакон или пробирку без консервирующего раствора и доставляется в лабораторию. До исследования образец хранится в холодильнике при температуре +4°С не более 12 часов.

Забор эякулята. Предварительно пациент воздерживается от половых контактов в течение 4-х суток. Необходимо вымыть руки, головку полового члена обработать стерильным изотоническим раствором. Эякулят получают методом мастурбации. Непосредственно перед эякуляцией крайняя плоть (при её наличии) пережимается, в результате чего сперма заполняет полость препуциума. Эякулят «массирующими» движениями перемешивают при закрытом отверстии препуциального мешка (чем обеспечивается гомогенность исследуемого материала) и в количестве 0,1 - 0,5 мл (в зависимости от использованного набора для выделения ДНК) помещают в одноразовую пробирку типа "Эппендорф". Забор эякулята для исследования на УГИ целесообразен при хронических эпидидимитах, патоспермии, а также при отсутствии возможности забора секрета простаты (поскольку последний является одним из компонентов спермы).

Самым информативным материалом при обследовании на хламидии мужчин с урогенитальной патологией оказалась именно сперма, а не секрет простаты и не уретра. Этот материал интегрирует компоненты практически из всех мужской половой системы: предстательной железы, канальцев яичка, семенных пузырьков, купферовых желез и т.д. Проходя (в момент эякуляции) с высокой скоростью по уретре, сперма «смывает» клетки призматического эпителия, прежде всего повреждённые, поражённые хламидиозом. Даже небольшого числа таких клеток при высокой чувствительности ПЦР достаточно для получения положительного результата.

Забор биологического материала из уретры у женщин. Женщины воздерживаются от мочеиспускания в течение 3-х часов перед взятием образца. При наличии обильных выделений, наружное отверстие уретры необходимо обработать тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором. Одноразовый зонд вводят в уретру на глубину 2 см, учитывая меньшую протяженность уретрального канала у женщин, по сравнению с мужчинами. Вращательными движениями зонда в течение 3-5 секунд собирают уретральный эпителий и помещают в одноразовую пробирку типа «Эппендорф», тщательно смывают материал с зонда в течение 15 секунд. Далее отжимают жидкость с зонда о стенку пробирки, зонд удаляют и дезинфицируют. Пробирку закрывают.

Забор биологического материала из цервикального канала женщин. С экзоцервикса ватным тампоном и пинцетом удаляют слизь, а затем берут материал. Зонд вводят в эндоцервикальный канал на глубину 1,5 см. и вращательными движениями в течение 3-5 секунд, избегая контакта с вагинальными поверхностями, производят соскоб со всей поверхности шейки матки, цервикального канала, захватывая зоны трансформации.

Зонд помещают в пробирку, тщательно смывают материал в течение 15 секунд, отжимают жидкость с зонда о стенку пробирки, избыток слизи удаляют зондом, зонд дезинфицируют. Пробирку закрывают.

Забор материала с задней стенки глотки. Вращательными движениями зонда по слизистой задней стенки глотки в течение 3-5 секунд собирают материал зондом и помещают его в пробирку, тщательно смывая материал в течение 15 секунд, отжимают жидкость с зонда о стенку пробирки, зонд удаляют и дезинфицируют. Пробирку закрывают.

Забор образцов первой порции утренней мочи (ППУМ). Собирают первую порцию утренней мочи в чистую пластиковую посуду в количестве 10 -50 мл и доставляют в лабораторию.

Исследования показали, что мочу можно использовать для выявления С. trachomatis амплификационными методами даже через 1 неделю после ее хранения при комнатной температуре. Тем не менее, лучше до момента доставки в лабораторию хранить мочу в холодильнике при +4°С.

Забор материала с конъюнктивы. Соскоб эпителия с конъюнктивы верхнего и нижнего века берут одноразовыми зондами. Возможно использование затупленного глазного пинцета или ложки Фолькмана.
Учитывая особенности биологического развития C.trachomatis, а именно то, что они размножаются внутри клеток цилиндрического и плоского эпителия, а также особенности технологии проведения полимеразной цепной реакции, разработаны

общие требования к качеству биологического материала для исследования их методом ПЦР:

1. Биологический материал со слизистых должен содержать как можно больше эпителиальных клеток. Отсутствие эпителия в образце может вызвать ложноотрицательный результат. Оптимальным для персистенции и размножения возбудителей ИППП являются определенные участки цилиндрического эпителия мочеполовых путей (передняя уретра на глубине 2,5-4 см у мужчин и слизистая оболочка цервикального канала матки 1,5 см у женщин).

2. Образцы, полученные вместе с зондом в пробирке, с присутствием большого количества слизи и крови не желательны для тестирования. Важным моментом при заборе материала является очищение слизистой от обильных выделений (слизистой пробки в цервикальном канале и уретре у женщин, выделений различного характера в уретре мужчин). Недостаточное удаление слизи и примесь крови в образце могут вызвать ингибирование полимеразной цепной реакции, что приведет к снижению чувствительности метода или даже ложноотрицательному результату.