Биохимические методы исследования сож - язвенная болезнь желудка
Видео: Приём у врача гастроэнтеролога в Энгельсе
Видео: Диагностика на аппарате Оберон
В последние годы с целью диагностики язвенной болезни и предъязвенного состояния применяют биохимические методы исследования ткани СОЖ, полученной методом слепой и прицельной гастробиопсии. В частности, нами у больных язвенной болезнью и с предъязвенным состоянием изучался аминокислотный фонд СОЖ, отражающий соотношение в ней катаболических и белково-синтетических процессов (И. И. Дегтярева, 1983- И. И. Дегтярева, Е. В. Солодова, 1984- И. И. Дегтярева, Е. В. Солодова, Е. В. Хоменко, Э. Ц. Тотева, 1987- И. И. Дегтярева, Н. В. Харченко, 1991- Н. В. Харченко, 1993- I. Degtjaryova, G. Burchinsky, 1982).
Для определения аминокислотного состава СОЖ, так же, как и сыворотки крови, использовали метод жидкостной колоночной хроматографии S. Moore, W. Н. Stein (1951), подробно описанный применительно к анализу белковых гидролизатов и анализу физиологических жидкостей (Дж. Б. Бенсон, Дж. А. Патерсон, 1974- Т. Д. Козаренко и соавт., 1981). Использовали автоматические аминокислотные анализаторы ILC-SAH Jeol (Япония), ВС-200 (Германия) и ААА-881 (Чехия).
Для определения свободных аминокислот сыворотки крови 5 мл цельной венозной крови помещали в коническую центрифужную стеклянную пробирку емкостью 10 мл и давали свернуться. Сгустки крови удаляли со стенок пробирки небольшой стеклянной палочкой и перемешивали со всей пробой. Пробу центрифугировали при 2500/3500 об/мин в течение 15 мин. Затем брали пипеткой 2 мл сыворотки крови и переносили в чистую центрифужную пробирку. Туда же для освобождения от белков добавляли 2 мл 3% водного раствора сульфосалициловой кислоты и все тщательно перемешивали. Выпавший белок отделяли центрифугированием в течение 15—20 мин при 2500/3500 об/мин. Надосадочную жидкость, содержащую свободные аминокислоты, сливали в вакуумный эксикатор и выпаривали.
Разгонку аминокислот осуществляли на цитратных буферах, растворяли на цитратном буфере pH 2,2, элюирование аминокислот производили цитратными буферами pH 3,25 для кислых аминокислот, pH 4,25 — для нейтральных и pH 5,28 — для основных. Исследование выполняли при температуре 52°С. Расчет производили по S. Moore и W. Н. Stein. Количество аминокислот выражали в микромолях на 100 мл крови.
Для определения свободных аминокислот СОЖ кусочки ткани, полученные методом аспирационной или прицельной биопсии, взвешивали и затем растирали, постепенно добавляя бидистиллированную воду (2 мл). Затем гомогенат ткани помещали в коническую центрифужную пробирку емкостью 10 мл. Туда же для освобождения от белков добавляли 2 мл 3% водного раствора сульфосалициловой кислоты. После тщательного перемешивания выпавший осадок отделяли центрифугированием в течение 30 мин при 2500/3500 об/мин. Надосадочную жидкость, содержащую свободные аминокислоты, сливали в вакуумный эксикатор и выпаривали. Дальнейшая подготовка аминокислот для исследования совершенно идентична описанной нами выше для определения свободных аминокислот сыворотки крови.
Количество свободных аминокислот СОЖ выражали в микромолях на 1 г ткани.
При определении свободных аминокислот СОЖ у больных язвенной болезнью обеих локализаций нами обнаружено резкое, почти в 2. раза, увеличение их суммарного количества. При определении количества отдельных аминокислот в СОЖ также установлено резкое их увеличение, причем, большинство из них (аспарагиновая, глутаминовая кислоты, серии, пролин, глицин, аланин, метионин) было увеличено в среднем на 50%- некоторые (аргинин, лейцин) —в среднем на 30%, а треонин и валин — в среднем на 80%. Резкое увеличение общего количества и отдельных аминокислот в СОЖ можно объяснить резко усиленными процессами катаболизма, и сниженными процессами синтеза белка, характерными для язвенной болезни, в результате чего аминокислоты, не включаются в синтез белков. При анализе процентного содержания аминокислот в СОЖ установлено, что, несмотря на абсолютное увеличение количества отдельных аминокислот, процентное отношение большинства из них не отличалось от такового в СОЖ здоровых. Полученные данные еще раз свидетельствуют о том, что увеличение общего количества аминокислот и отдельных их представителей зависит от катаболических процессов и замедленного синтеза белка в СОЖ при язвенной болезни, а не от каких- либо специфических реакций, связанных с обменом отдельных аминокислот. Доказательством этого служит также то, что несмотря на количественное увеличение, процентное содержание незаменимых и заменимых аминокислот и их коэффициента соотношения, незаменимых + полузаменимых и заменимых аминокислот и их коэффициента соотношения не отличаются от аналогичных показателей у здоровых.
О снижении конкурентного включения аминокислот в полипептидную цепь структурных и специфических белков в СОЖ при язвенной болезни свидетельствует резкое уменьшение (в 7,3 раза) коэффициента лейцин/изолейцин, что также подтверждает резкое снижение при данном заболевании белковосинтетических возможностей СОЖ-.
О снижении белковосинтетических и усилении процессов распада белка в СОЖ при язвенной болезни свидетельствуют также данные, полученные нами при изучении ультраструктуры клеточных и неклеточных элементов и активности лизосомальных ферментов в СОЖ: нарушения в структурах, ответственных за синтез белка, и в уже синтезированном белковом материале, а также резкая активация лизосомального аппарата даже в молодых, не закончивших дифференциацию, клетках на фоне резкого усиления реакции на лизосомальные ферменты КФ и АрС (И. И. Дегтярева, 1983- И. И. Дегтярева и соавт., 1985, 1990, 1991, 1992- Н. В. Харченко, 1993).
Таким образом, изменения аминокислотного состава сыворотки крови и СОЖ при язвенной болезни объясняются общей катаболической направленностью белкового обмена в организме, обусловленной нейрогенной дистрофией. Если СОЖ реагирует на нарушение трофики тканей однонаправленно (усиление распада и замедление синтеза белков), то в печени, являющейся аминостатом, единственным органом, в котором, помимо синтеза белка, обеспечивающего гомеостаз организма, происходит превращение и синтез аминокислот, не только снижается синтез белка, но и нарушается превращение аминокислот.
Белковый обмен является основой регенерации тканей и нарушение его у больных язвенной болезнью не может не влиять на развитие и течение заболевания. Усиление катаболических при снижении белковосинтетических процессов в СО гастродуоденальной зоны приводит, с одной стороны, к ускорению гибели клеток и снижению их резистентности, с другой — к замедлению воспроизводимости тканей. Следовательно, нарушение протеинового обмена с превалированием распада над синтезом белков отражает одно из патогенетических звеньев язвенной болезни, приводящих к рецидиву заболевания, препятствующего обновлению клеточного состава СОЖ и двенадцатиперстной кишки, и заживлению язвенного дефекта.
Для коррекции обнаруженных нами нарушений в лечебный комплекс, назначаемый при язвенной болезни, следует включать препараты, устраняющие нервно-трофические нарушения, вызывающие катаболическую направленность белкового обмена в организме, стимуляторы белкового синтеза, усиливающие белковосинтетические процессы в печени, гастродуоденальной зоне и обеспечивающие активную репарацию. Учитывая выраженный дефицит пластического материала у больных язвенной болезнью, аминокислот, необходимых для построения белков, а также повышенную потребность в нем при назначении стимуляторов белкового синтеза, мы полагаем, что в лечебный комплекс должны быть включены препараты, содержащие аминокислоты,— белковые гидролизаты или чистые смеси аминокислот.
При хроническом первичном гастродуодените (предъязвенном состоянии) исследование аминокислотного фонда СОЖ имеет такое же диагностическое значение, как и при язвенной болезни.. Установлено (И. И. Дегтярева, Е. В. Солодова, Е. В. Хомен, Е. Ц. Тотева, 1987- И. И. Дегтярева, Г. И. Бурчинский, Е. В. Хоменко, Е. Ц. Тотева, 1987), что у данной категории больных резко возрастает общее количество аминокислот как заменимых, так и незаменимых, что свидетельствует о гиперкатаболизме белков в СОЖ больных с предъязвенным состоянием.
На клиническое значение определения количества рибонуклеиновой кислоты в СО гастродуоденальной зоны указывают С. В. Пришва, Г. Е. Шмеркин (1986). Установлено, что содержание РНК в гомогенатах СО желудка и двенадцатиперстной кишки у больных язвенной болезнью значительно уменьшается по сравнению со здоровыми, причем наибольшее снижение РНК наблюдается в области малой кривизны и луковицы двенадцатиперстной кишки, в местах наиболее частой локализации хронической язвы. В период ремиссии количество РНК в гомогенатах СО повышается, но не достигает нормальных величин. Нарушение обмена РНК при язвенной болезни, по мнению авторов, может быть причиной ослабления резистентности гастродуоденальной зоны, создающей условия для формирования хронической язвы.
Количество ДНК в СО желудка и двенадцатиперстной кишки не отличалось от такового у здоровых.
Общее количество нуклеиновых кислот в гомогенатах СОЖ определяли биохимическим, флуоресцентным этидиумбромидным методом и в модификации С. В. Пришвы и соавторов (1983);
