Антигенная структура - краснуха
Видео: Клебсиеллы
Видео: Бакшеева С.С. Антигены. Антитела
Как уже упоминалось в разделе «Характеристика вириона», в культуре клеток, зараженной вирусом краснухи, определяются инфекционные вирусные частицы, обладающие одновременно ГА- и КС-активностью (так называемые V-антигены), и «растворимый» антиген («S»), имеющий только КС-активность. Кроме того, с помощью метода иммунодиффузии можно выявить два или три преципитирующих антигена. Описан также антиген, выявляемый в реакции агрегации тромбоцитов (PAT) (Vaheri, Vesikari, 1971). Специфический антиген вируса краснухи можно выявить также методом иммунофлуоресценции (Brown е. а., 1964).
До настоящего времени с помощью имеющихся в наличии методов не удалось обнаружить сколько-нибудь значительных антигенных различий между штаммами вируса краснухи различного происхождения. Можно предположить, что вирус краснухи, подобно вирусу кори, в естественных условиях встречается в виде одного серотипа.
Остановимся более подробно на описании КС- и ГА-антигенов, так как эти антигены имеют наибольшее значение в практике изучения инфекции, вызываемой вирусом краснухи.
Комплементсвязывающий антиген. В культурах инфицированных клеток КС-антиген выявляется в виде связанного с вирионом V-антигена с плавучей плотностью в градиенте сахарозы, равной 1,19—1,21 г/см3, и в виде «растворимого» антигена, имеющего плавучую плотность 1,08—1,11 г/см3 (Schmidt, Lennet, 1969).
КС-активность вируса краснухи впервые обнаружили Sever и др. (1965) при культивировании в первичной культуре почки зеленой мартышки и клетках RK13. Антиген в титрах 4—8 единиц выявляли в 30% суспензии клеток, концентрированной в 200 раз на 2—3-й день после заражения. Для получения антигена использовали и другие культуры клеток: LLC-MK2, GMK.-AH-1, Vero. В последней культуре клеток с помощью концентрации надосадочной жидкости удавалось получить антиген в титрах 8—64 единицы. В. В. Чеботарев и О. Т. Оганесян (1970) получали КС-антиген путем троекратного замораживания и оттаивания культур клеток почки зеленой мартышки, инфицированной вирусом краснухи. В последующем авторы применяли экстрацию путем воздействия ультразвуком в течение 15 мин и получали антиген в очень высоком титре (В. В. Чеботарев, В. П. Моисеев, 1971).
Хорошей культурой для получения КС-антигена оказались клетки ВНК21, которые использовались как в монослойной, так и в суспензионной культурах (Halonen е. а., 1967а). Максимальные титры антигена получали при посеве клеток, зараженных вирусом с множественностью 0,01—1 на клетку.
КС-антиген без существенного снижения титра сохраняется в течение 12 мес при температуре 4°- нагревание до 56° инактивирует антиген в течение часа- при —70° антиген может храниться несколько лет. Обработка формалином (1:2000) или УФ-лучами, разрушая инфекционность, не снижает титра антигена.
Гемагглютинирующий антиген. ГА-антиген впервые получен Stewart и др. в 1967 г. Предшествующие этому неудачи при получении антигена были обусловлены тем, что сыворотки животных, добавляемые в культуральную жидкость, содержали вещества, ингибирующие гемагглютинацию вируса краснухи. В более поздних исследованиях установили, что этот термостабильный ингибитор гемагглютинации является р-липопротеином (Chang, Weinstein, 1972), который можно удалить из
сыворотки с помощью соответствующей обработки. Stewart и др. (1967) использовали поддерживающую среду, содержащую фетальную сыворотку крупного рогатого скота, обработанную каолином. Вместо сыворотки, обработанной каолином, можно использовать также раствор альбумина крупного рогатого скота. Другим существенным моментом при получении ГА-антигена является применение высокой множественности заражения (0,5—1,0 на клетку), что приводит к интенсивному размножению вируса и быстрому увеличению титров.
Весьма эффективным оказалось применение суспензионных культур. Оно позволяет получать большие количества антигена. Stewart и др. (1967) получали антиген на клетках ВНК21, которые до сих пор являются наиболее удобной культурой для приготовления антигена, хотя с этой целью используются также некоторые другие системы клеток.
Важным этапом в приготовлении ГА-антигена является обработка вируссодержащего материала твином-80 и эфиром по Norrby (1962), в результате которой существенно повышаются титры, S кроме того, антиген, приобретает термостабильность.
Halonen и др. (1967b) добивались получения высоких титров ГА-антигена, экстрагируя вирус из суспензии клеток путем обработки в течение 30 ч при температуре 35° алкалиновым буферным раствором (pH 9,0) и последующим воздействием ультразвуком в течение 30—60 мин.
В нашей лаборатории Р. Г. Десятскова (Р. Г. Десятскова, Э. Ф. Опочинский, 1973) получила ГА-антиген, используя монослойную культуру клеток ВНК21 13S и штамм Sp-2 вируса краснухи, адаптированный к данной культуре (Furukawa е. а., 1967). Существенными моментами при получении антигена были применение высокой множественности заражения, использование в поддерживающей среде сыворотки теленка, обработанной каолином, и обработка твином-80 и эфиром. Титр вируса в культуральной жидкости до обработки составлял 8— 64 единицы- после, обработки титры антигена увеличивались в 4—32 раза.
Вирус краснухи агглютинирует эритроциты многих видов птиц и млекопитающих- голубей, кур, гусей, индюков, японских перепелок, крыс, кроликов, овец, свиней, собак, кошек, обезьян и человека с группой крови О (Э. А. Кулиш и др., 1973- Schmidt е. а., 1971).
По последним данным, обработка эритроцитов трипсином приводит к 2—4-кратному повышению чувствительности эритроцитов к гемагглютинирующему действию вируса краснухи (Э. А. Кулиш и др., 1973). По мнению исследователей это связано с разрушением ингибиторов агглютинации белковой природы, находящихся на поверхности эритроцитов, что приводит к демаскировке скрытых небелковых эритроцитарных рецепторов.
Гемагглютинин в нативных препаратах вируса краснухи весьма термолабилен- обработка твином-80 и эфиром резко увеличивает устойчивость антигена к внешним воздействиям. При температуре —20—70° обработанный антиген может сохраняться годами.
