Применение лазерорефлексотерапии при лучевой патологии - комплементарная медицина
Располагая достаточным клиническим опытом по иридологической симптоматике при радиационных повреждениях, целесообразным было разработать экспериментальную модель с целью проверки клинических результатов. В качестве экспериментальных животных использовались кролики линии шиншилла. Радужная оболочка таких животных окрашена в серые тона различной интенсивности, имеет четко сформированное автономное кольцо. У некоторых животных на ирисе наблюдались адаптационные кольца, лимфатический розарий. Зрачок имел правильную овально-вертикальную форму, его площадь была гораздо больше, чем у человека. Как правило, встречался гомогенный или радиально-гомогенный тип радужной оболочки.
У контрольных и подопытных животных ирисы фотографировали на цветную позитивную пленку до облучения и затем в динамике после него. В специальных камерах кролей тотально облучали рентгеновским излучением дозой 500 (12,9-10 2 Кл/кг) и 1000 Р (2,58-10—1 Кл/кг) однократно. Выбор таких доз и режима облучения связан с тем, что однократные дозы — излучения с высокой мощностью — для животных могут быть в 4 раза эффективнее хронического. При облучении кролей дозой 500 Р (12,9-10 2 Кл/кг) их гибель составляла 44 % и наступала, как правило, в течение месяца после облучения. У всех погибших животных развивалась лучевая болезнь с выраженными клиническими проявлениями: потерей массы, адинамией, повышением температуры до 40 — 41 °С, побледнением слизистых оболочек, развитием диареи, изменением формулы крови [218]. На вскрытии наблюдались массивные кровоизлияния в подкожную клетчатку паховых областей, дегенерация печени, почек, миокарда, расширение сосудов желудка и брыжейки тонкого кишечника, уменьшение селезенки. У кроликов, выживших после облучения, проявления острой лучевой болезни были выражены в меньшей степени. Количество лейкоцитов понижалось на 5 — 10-е сутки до 15,0 —20,0 %, затем постепенно восстанавливалось до 93 % к 45-м суткам. При офтальмологическом исследовании через 7 мин после облучения у некоторых животных отмечали умеренную гиперемию конъюнктивы (симптом &ldquo-солнце&rdquo-) или кровоизлияние под конъюнктиву глазного яблока. На глазном дне уже через 2 — 3 ч после облучения вены были расширены [218].
При облучении кролей дозой 1000 Р (2,58-10 1 Кл/кг) гибель животных наступала на 5 — 14-е сутки, так как эта доза превышает летальную. После облучения в течение 3 ч наблюдались значительная гиперемия сосудов радужной оболочки, выраженный миоз, тромбоз и кровоизлияние в сосудах сетчатки. Гибель животных наступала от острого кишечного лучевого синдрома [218].
Клиническая картина лучевой болезни у всех животных проходила однотипно. Постепенно развивающиеся адинамия, расстройство дыхания и кратковременные судороги в терминальном периоде — по существу, единственные внешние проявления заболевания. Начиная с 2-х сут после облучения животные значительно теряли в массе. Ведущий синдром при острой лучевой болезни — нарушения со стороны тонкого кишечника. Это дало повод Квастлеру ставить диагноз &ldquo-острая кишечная лучевая смерть&rdquo-. Острый кишечный лучевой синдром наблюдается у животных при рентгеновском облучении и при воздействии нейтронов [125]. При острой кишечной смерти происходят деструкция и анаплазия эпителия стенки тонкого кишечника, отчетливое утолщение подслизистого слоя, в результате чего — обширное обнажение стенки и в связи с этим нарушение процессов всасывания пищи, потеря воды и электролитов [125].
Таким образом, одним из механизмов, вызывающих смерть на ранних сроках после облучения большими дозами, являются повреждение органов брюшной полости и приводящее к более поздней гибели повреждение ЦНС. Это выражается в изменениях структуры нервного волокна, потере миелина, развитии энцефалитов и некрозов. Оно частично обусловлено первичными нарушениями кровеносных сосудов и необратимо. Структурные повреждения нервных клеток наступают после облучения дозой 1 — 6 Гр. Они могут вызывать дегенеративные изменения клеток коры мозга и через несколько месяцев после облучения привести к деструкции ее отдельных участков.
При тотальном облучении симптомы нарушения ЦНС проявляются с более длительным латентным периодом, в связи с чем маскируется явлениями поражения пищеварительного тракта, приводящими организм к гибели в более ранние сроки. Наряду с поражением тонкого кишечника большую роль играют нарушения функции печени, так как одновременная защита экраном при облучении этих органов обеспечивает наибольшую продолжительность жизни животных. В то же время имеются данные, свидетельствующие об определенном коррелирующем значении гипофиз-адреналовой системы в развитии кишечного лучевого синдрома [125].
В основе иммунопатологических реакций облученного организма лежит аутоиммунизация продуктами распада клеток, которые обильно поступают из облученных, легко разрушающихся радиочувствительных тканей со значительной массой. Это в первую очередь слизистая оболочка кишечника, костный мозг и лимфоидный аппарат [125]. В результате кратковременного облучения в летальной дозе из поврежденных клеток продукты распада непрерывным потоком (что облегчается повышением проницаемости сосудов) поступают в кровь и лимфу, быстро истощая защитные резервные возможности нормальных физиологических систем, обычно обеспечивающих нейтрализацию вредного влияния продуктов гибели и метаболизма клеток. Важным и весьма неприятным последствием воздействия продуктов распада облученных клеток является аутоиммунизация, т. е. последующее развитие патологической противотканевой иммунной реакции. В результате через 3 — 5 сут кровь содержит аутоантитела, обладающие цитотоксическим действием на клетки и нарушающие деятельность некоторых органов и физиологических систем. Количество таких агрессивных аутоантител особенно возрастает в период разгара лучевой болезни. В организме постепенно формируется состояние повышенной чувствительности к тканевым веществам, т. е. аутоаллергия, обусловливающая характерные клинические симптомы: лейкопению, анемию, геморрагический синдром, поражение желудочно-кишечного тракта, а также непереносимость к введению даже изологических клеток и белков.
Органы зрения обычно рассматриваются как одни из наиболее радиочувствительных. Повреждаются все структуры глаза, но наиболее чувствительной частью является хрусталик. При высоких дозах помутнение хрусталика развивается в течение нескольких месяцев, быстро прогрессирует и приводит к выраженной катаракте. При низких дозах помутнение развивается на протяжении нескольких лет, имеет небольшие размеры и существенно не влияет на остроту зрения.
Длительное облучение в малых дозах порядка 1 Гр приводит только к локальной артериальной гипотензии и усилению проницаемости сосудов глаза. Признаки структурных нарушений появляются при суммарных дозах 1,5 —4 Гр [125].
После облучения суммарной дозой 30 — 100 Гр во всех структурах глаза повреждаются сосуды. Повреждение развивается медленно, в течение нескольких месяцев и приводит к изменению просвета сосудов, деформации сосудистых ветвей, возникновению аваскулярных полей. Через 1 — 2 года в области глазного дна обнаруживаются очаги экссудации, кровоизлияние, утолщение стенок сосудов, атоническое расширение вен, участки тромбоза [98].
Облучение головы дозой 1,5 Гр через 1 —6 мес ведет к некоторому увеличению в хрусталике 2)-аспартата, сопровождающемуся помутнением хрусталика. Содержание D-аспартата является одним из индикаторов процесса старения [125].
Пороговые дозы для некоторых нестохастических эффектов облучения в тканях глаза человека представлены в табл. 1.
Нами показано, что острая лучевая болезнь кролей протекает с существенными изменениями радужной оболочки глаза и формы зрачка, что происходит на фоне общих проявлений лучевого поражения — исхудание, вялость, выпадение шерсти, кровяной понос, отказ от корма и т. д. Кроли погибали в течение месяца.
Структура | Эффект | Облучение, Гр | |
однократное | многократное | ||
Кожа век | Ранняя эритема | 4—6 | — |
Слезная железа | Атрофия | 20 | 50—6 |
Конъюнктива | Поздняя телеангиэктазия | — | 30—50 |
Роговица | Ранний отек и кератит | 10 | 30—50 |
Склера | Поздняя атрофия | — | 200 — 300 |
Сетчатка | Ранний отек | — | 30—35 |
Поздняя дегенерация | — | 30—50 | |
Хрусталик | Катаракта | 2 — 10 | — |
При изучении цветных слайдов радужной оболочки подопытных кролей нами обнаружено, что патологические знаки при лучевой болезни проявлялись на 6 — 19-е сутки после облучения. В проекционной зоне мозга отмечен симптом &ldquo-костра&rdquo-, свидетельствующий о нарушении кровоснабжения головного мозга, выраженной нейроциркуляторной дистонии. Постепенно происходило высветление всей радужной оболочки, так называемый симптом &ldquo-сметанки&rdquo-, свидетельствующий об изменении гомеостаза организма. Дистрофический ободок ириса резко темнел и расширялся, что указывает на накопление в организме продуктов распада тканей. На 19-е сутки наблюдался симптом уплощения обоих зрачков в зонах мозга и селезенки. Уплощение зрачков в зоне на &ldquo-12.00&rdquo- и симптом &ldquo-костра" наблюдались в 100 % случаев, что свидетельствует о тяжелом поражении и отеке мозга.
Лазероиридорефлексотерапию (ЛИРТ) кролей проводили ежедневно по 15 с на каждую проекционную зону (гипофиз, гипоталамус, продолговатый мозг, тимус, селезенка, тонкий кишечник (по схеме Е. С. Вельховера)). Плотность мощности пучка гелий-неонового лазера составляла 1 мВт/см2. Кроли опытной группы получали по 10 сеансов ЛИРТ. Всего в эксперименте принимало участие три группы животных (кроли породы шиншилла): 1-я группа — опытная, которая получала тотальное облучение и курс ЛИРТ- 2-я — контрольная, получала только тотальное облучение- 3-я — чистый контроль. В каждую группу входило по 10 животных. Иридографию проводили до облучения, затем в динамике после него.
У животных, которым проводили курс ЛИРТ, наблюдалось лишь некоторое сглаживание признаков острой лучевой болезни (отсутствие кровавого поноса, несколько большая активность). Однако гибель животных в опытной и контрольной группах наступала практически одновременно.
Из приведенных данных становится понятным, что в указанном случае эффект ЛИРТ как терапевтический не проявился. При таких больших дозах облучения лазерная, опосредованная через ирис, стимуляция неэффективна. Поэтому в следующих экспериментах нами была использована доза тотального облучения животных 500 Р (12,9-10 2 Кл/кг), остальные условия опыта не изменяли.
Поскольку электрофоретическая подвижность (ЭФП) клеток крови является очень чувствительным индикатором радиационного повреждения организма, мы решили использовать этот тест в своих исследованиях. Анализы крови на ЭФП у всех животных брали до рентгеновского облучения, а затем в динамике на 6, 13, 20, 27-е сутки после облучения. Опытная группа получала еще курс ЛИРТ (12 сеансов).
Клетки крови, так же как и высокомолекулярные вещества организма, при физиологическом значении pH несут на своей поверхности избыточный отрицательный заряд. Электрический заряд клеток играет важную роль во всех физиологических отправлениях —газообмене, адсорбции аминокислот, белков и продуктов их распада, ферментов, антигенов и антител, чужеродных веществ, поступающих в кровь, и образовании структуры движущей крови. Следовательно, для нормального выполнения своих функций клетки крови должны иметь стабильный электрический заряд, который обусловливается химической структурой их поверхности и составом окружающей среды. При патологических состояниях организма электрический заряд клеток крови может существенно изменяться как в результате изменения физико-химической структуры клеточной поверхности, так и вследствие нарушения состава окружающей среды — появления в крови антител, патологических белков и продуктов распада клеток.
Отрицательно заряженная поверхность клетки крови притягивает из окружающей среды противоположно заряженные ионы — противоионы, которые под воздействием электростатических сил стремятся приблизиться к ионизированным группам клеточной мембраны. В результате клетка оказывается окруженной двойным электрическим слоем. Его потенциал называется дзета-потенциалом (Z-потенциалом), или электрокинетическим потенциалом, который является лишь частью полного электрохимического (термодинамического) потенциала клетки. Чем толще двойной электрический слой клетки, тем больше величина ее Z-потенциала.
ЭФП клеток крови, т.е. скорость перемещения клеток, суспензированных в буферном растворе или взвешенных в естественной среде — плазме крови, в наведенном электрическом поле зависит от напряженности поля, особенностей структуры клеточной мембраны, величины pH, ионной силы, диэлектрической постоянной, вязкости и температуры среды, от Z-потенциала клетки.
При определении изоэлектрического состояния клеток крови, особенно эритроцитов, следует иметь в виду, что на величину pH их изоэлектрической точки оказывают существенное влияние продукты разрушения клеток, которые, адсорбируясь на поверхности неразрушенных эритроцитов, снижают их ЭФП и тем самым перемещают pH изоэлектрической точки в менее кислую область. Показано, что в определении заряда эритроцита главная роль принадлежит липоидам — фосфатидам, преимущественно кефалинам, у которых остатки фосфорной кислоты обращены к наружной поверхности оболочки, а основные группы — к ее внутренней стороне. В результате такой ориентации полярных групп обеспечивается высокая плотность электрического заряда эритроцитов, их изоэлектрическая точка смещается в кислую сторону.
Для определения электрофоретической скорости клеток крови использовали микрометод. Его принцип заключается в том, что в специально смонтированных микроаппаратах с помощью микроскопа, секундомера и окулярной сетки измеряется скорость перемещения каждой клетки крови под действием ЭП. Время прохождения клеткой условного расстояния измеряют в секундах: чем больше время прохождения, тем ниже ЭФП клеток крови, т.е. наблюдается обратно пропорциональная зависимость.
Для определения ЭФП клеток крови кролей брали кровь (0,5 мл) из ушной вены, помещенную в трис-глициновый буфер. Затем клетки крови трижды отмывались в данном буфере и осаждались центрифигурированием при 1,5 тыс об/мин. Затем полученные отмытые эритроциты помещали в трис-глициновый буфер и отбирали аликвоту в электрофоретическую камеру при комнатной температуре.
Опытные и контрольные образцы крови обрабатывались строго в стандартных условиях при pH буфера 7,2.
В литературе имеются данные, свидетельствующие, что метод ЭФП позволяет выявить очень слабые изменения в состоянии организма, перенесшего в прошлом воздействие ионизирующей радиации4. На это указывают результаты работ, в которых выявлено достоверное снижение ЭФП эритроцитов крыс, облученных дозой 0,01 Гр. Этот эффект проявлялся через 10 — 30 недель после лучевого воздействия и отражал, по мнению авторов, сублетальные повреждения в стволовых клетках костного мозга, ответственных за эритропоэз, которые вызывают появление в кровеносном русле эритроцитов со сниженной величиной электрического поверхностного заряда. Продемонстрировано снижение ЭФП клеток крови после гамма- и нейтронного облучения, а также осциллирующие колебания ЭФП. Вместе с тем другие исследователи сообщили о возрастании ЭФП клеток после лучевого воздействия, в частности для лейкоцитов крови крыс и лимфоидных клеток. Таким образом, ЭФП зависит от дозы облучения и вида воздействия, а также от самого объекта воздействия и, в свою очередь, имеет тенденцию к осциллирующим колебаниям во время и после облучения. Предполагается, что снижение ЭФП клеток после радиационного поражения связано с отрывом отрицательно заряженных гликопротеинов от клеточной поверхности либо со снижением их синтеза после облучения. Некоторые исследователи предполагают, что облучение приводит к увеличению представленности на клеточной поверхности центров связывания высокоактивных молекул типа гепарина, способных активизировать различные ферменты, например липазу, отщепляющую положительно заряженные группировки, что может привести к росту суммарного отрицательного заряда клеточной поверхности и снижению ЭФП. В целом отщепление сиаловых кислот и других компонентов облученных клеток, как указывают результаты экспериментов, имеет место, особенно при использовании сублетальных и тем более летальных доз радиации.
Результаты наших измерений ЭФП у облученных кролей представлены в табл. 2.
Таблица 2. Динамика изменения ЭФП эритроцитов у облученных кралей
Фактор | ЭФП, с | ||||
до радиационного облучения | на 6-е сутки | на 13-е сутки | на 20-е сутки | на 27-е сутки | |
Радиация + ЛИРТ | 3,11 | 2,10 | 4,13 | 3,13 | 4,63 |
3,62 | 2,92 | 4,28 | 3,61 | 3,81 | |
3,58 | 3,94 | 4,01 | 3,33 | 4,88 | |
3,38 | 2,11 | 5,78 | 3,45 | 5,34 | |
среднее | 3,42 | 2,27 | 4,55 | 3,26 | 3,99 |
нормированное среднее | 1,0 | 0,66 | 1,33 | 0,95 | 1,17 |
Радиация | 6,51 | 3,02 | 5,60 | 3,35 | 3,68 |
7,24 | 4,46 | 4,26 | 2,87 | 3,62 | |
4,37 | 2,06 | 6,05 | 3,64 | 3,99 | |
4,06 | 3,40 | 8,93 | 4,02 | 4,66 | |
среднее | 5,54 | 3,24 | 6,22 | 3,47 | 4,71 |
нормированное среднее | 1,0 | 0,59 | 1,12 | 0,63 | 0,85 |
ЭФП клеток крови после тотального облучения кролей дозой 500 Р (12,9*10 2 Кл/кг) снижается (увеличивается время прохождения), особенно на 13-е сутки. ЭФП также имеет тенденцию к осциллирующим колебаниям.
Итак, на модели острой лучевой болезни показано, что иридо- лазеропунктура соответствующих зон радужной оболочки ведет к стабилизации ЭФП клеток крови кролей, что явно отличается от контроля, где данный показатель снижается после радиационного поражения.
