Азокрасители реагируют с метионином - рак: эксперименты и гипотезы

Метаболические продукты азокрасителей, как правило, анализируются при помощи хроматографии на колонках. При проведении анализов ДАБ вводили крысе внутрибрю-
шинно- через день крысу забивали, печень удаляли и гомогенизировали, после чего гидролизовали в холодной щелочи и экстрагировали смесью бензола и гексана. После дальнейшей очистки экстракта смесь красителей разделяли на колонке с окисью алюминия. Помимо ДАБ, не подвергшегося изменениям, посредством описанного метода легко выделяли и демонстрировали МАБ и АБ. С его помощью Миллерам удалось показать деметилирование ДАБ в организме крысы еще в 1945 г.
В конце 1950 г. получил широкое распространение новый метод — газовая хроматография. Анализируемую смесь переводили в газообразное состояние и пропускали через разделительную, колонку при помощи газа-носителя — аргона или гелия. В зависимости от природы стационарной фазы (наполнителя колонки) различные вещества в газовой смеси задерживаются в колонке по-разному, что и является основой их разделения. Газовая хроматография — более совершенный метод по сравнению с хроматографией на бумаге или хроматографией на колонках: она позволяет не только лучше производить разделение, но и делать это быстрее и с большей чувствительностью.
Метод газовой хроматографии, позволяющий отделять ДАБ от продуктов его деметилирования, был подвергнут проверке, так как предполагалось применить его к другим исследованиям алкильной группировки, присоединенной к азоту АБ. Однако последние опыты так и не были поставлены, поскольку первый пробный эксперимент со смесью красителей, выделенной из крысы, дал четыре пика вместо ожидаемых трех.
Что же собой представлял новый пик? После того как удалось показать, что новое соединение действительно является красителем, небольшие его количества подвергли микрохимическим анализам, позволившим дать лишь предварительное заключение. Для того чтобы получить это соединение в ощутимых количествах, пришлось забить сотни крыс, гомогенизировать сотни крысиных печеней, гидролизовать их и экстрагировать. В результате было получено 250 мкг (довольно большое количество) в виде желтой пленки на дне колбы. Полученное вещество подвергли инфракрасной спектроскопии, а для сравнения синтезировали вещество с такими же параметрами. Выделенное из крыс неизвестное соединение и соединение, синтезированное для сравнения, оказались полностью идентичными,

Если допустить, что СНзЬ-группа — производное метионина, то метионин должен реагировать с МАБ. Известно, однако, что МАБ не вступает в эту реакцию. Тем не менее N-оксипроизводные, по-видимому, обладают такой способностью, поскольку их можно найти среди продуктов метаболизма всех других изученных аминов.
К сожалению, N-OH-МАБ, как мы уже отмечали, недоступен исследователям, но в нашем распоряжении находится его бензольный эфир (IV). И действительно, оказалось достаточным просто смешать N-бензоил-окси- МАБ с метионином и обработать смесь холодной щелочью, чтобы получить 3-CH3S-MAB.

Если же набраться терпения (4 ч), то щелочь можно даже и не добавлять. В любом случае для прохождения реакции не требовалось никакого фермента. Так удалось осуществить прямую реакцию между «активированным» канцерогеном и компонентом клетки. На этом этапе оставалось решить лишь два важных вопроса: сам ли эфир вступает в реакцию и является ли именно этот эфир канцерогеном?