Опухолевые днк-вирусы в культуре ткани - рак: эксперименты и гипотезы
В настоящее время исследователи открывают все большее число опухолевых вирусов и опухолей, которые могут вызываться вирусами. Однако долгое время положение вирусологии в онкологии было весьма сомнительным.
Во многих случаях отсутствовали доказательства того, что опухоли действительно были вирусного характера, поскольку из многих опухолей, вызываемых вирусами, вирус «исчезал». Таким образом, доказать вирусную этиологию, пользуясь классическими критериями бактериологии, было невозможно.
Встречались трудности и чисто методического порядка: из-за длительных латентных периодов, длящихся несколько месяцев, а то и свыше года, ставить быстрые опыты было нельзя. Точные эксперименты оставались неосуществленными: многие подопытные животные по-разному реагировали на вирусные препараты, а сами препараты по своей активности существенно отличались в разных сериях. Положение дел в корне изменилось лишь тогда, когда ученые прибегли к методам культур тканей для решения стоящих перед вирусологией опухолевых проблем. «Некоторые опухолевые вирусы легко размножаются в таких культурах, что делает возможным как точную количественную оценку, так и эффективное воспроизводство вируса- иногда вирусы вызывают трансформацию нормальной клетки в клетку, имеющую свойства опухолевой. И все это удается продемонстрировать не в течение месяцев, а в течение нескольких дней!» (Хабел).
Прежде чем мы обратимся к рассмотрению поведения опухолевых ДНК-вирусов в культурах ткани, обсудим некоторые практические проблемы.
Подсчет живых вирусов с использованием теста с просветлениями
Вирусы можно подсчитывать непосредственно под электронным микроскопом, однако, поскольку при этом считают как мертвые вирусы, так и «пустые оболочки», выводы могут не соответствовать истине. Вот почему целесообразнее подсчитывать лишь активные частицы. С этой целью следует подобрать тип клеток, в которых хорошо размножается данный вирус (клетки почек обезьяны для вируса полиомиелита, клетки зародышей мыши для вируса полиомы), инокулировать эти клетки в чашки Петри и ждать образования плотного слоя клеток. Затем клетки инокулируют разведенным раствором вируса, дают возможность вирусу войти в клетки и покрывают культуру слоем агара. Описанный прием позволяет избежать беспрепятственной диффузии вирусных частиц, высвобождающихся из инфицированных клеток в результате лизиса. 
ПОДСЧЕТ ВИРУСОВ ПРИ ПОМОЩИ ПРОБЫ С ПРОСВЕТЛЕНИЯМИ
ПРОДУЦИРОВАНИЕ И ТРАНСФОРМАЦИЯ
ДЕМАСКИРОВАНИЕ ПОСЛЕ СЛИЯНИЯ
ОПУХОЛЕВЫЕ ДНК-ВИРУСЫ В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК
Поэтому вирусные частицы способны инфицировать только клетки, находящиеся в непосредственном соседстве, и лишь в них размножаться. В результате отдельный вирус как бы «проедает» дырку (просветление) в слое клеток, видную невооруженным глазом. Если в растворе вируса имеется всего несколько вирионов (множественные или индивидуальные вирусные частицы), то несколько дырок, появляющихся на пластинке, не сольются в одну. В таком случае их легко подсчитать и тем самым произвести оценку числа активных вирусных частиц—«инфекционных единиц» (фиг. 39).
Описанный метод позволяет дать количественную оценку многих вирусов, проявляющих патогенность у животных: вирусов полиомиелита, аденовирусов, а также опухолевых вирусов.
