Техника изготовления гистологических препаратов - основы гистологии
Видео: Гистологическая техника
Хороший гистологический препарат должен отвечать следующим основным требованиям: 1) исследуемая ткань должна в максимальной степени сохранять свое прижизненное строение- 2) срез должен быть достаточно тонким и прозрачным (для того чтобы через него свободно проникали лучи проходящего света)- 3) изучаемые микроструктуры должны отчетливо выделяться на общем фоне препарата.
Именно на обеспечение этих требований и направлены все усилия в процессе приготовления микроскопического препарата.
Первое из условий обеспечивается своевременным взятием и надлежащей фиксацией исследуемого материала, второе — качественным приготовлением и обработкой срезов, третье — соответствующей окраской изучаемых микроструктур.
Взятие материала для изготовления гистологических препаратов
Сбор материала является первым этапом в приготовлении гистологических препаратов, и от того, насколько правильно выполнена эта процедура, зависит успех всей работы. Существует несколько путей получения материала: 1) от животных, умерщвленных специально для этих целей- 2) от животных и людей в результате прижизненного оперативного иссечения кусочков тканей из органов живого организма (биопсия)- 3) взятие материала от трупа.
Там, где возможно, следует предпочесть первые два способа, так как они позволяют приготовить препараты, наиболее полно отражающие прижизненное состояние микроструктур.
Качество трупного материала находится в прямой зависимости от времени, прошедшего с момента смерти организма, так как в органах и тканях очень скоро начинают развиваться посмертные изменения. Об этом следует постоянно помнить и по возможности стремиться к максимальному сокращению сроков взятия материала. В нашей стране вскрытие трупов людей разрешено не ранее чем через 12 ч после констатации смерти врачом. Лишь в отдельных случаях допускается более раннее вскрытие в присутствии комиссии, состоящей не менее чем из трех врачей (Приказ Министерства здравоохранения СССР № 667 от 15.10.70 г.).
Умерщвление экспериментальных животных
В лабораторной практике применяют ряд методов умерщвления экспериментальных животных: отсечение головы (декапитация), умерщвление при помощи наркоза, пропускание электрического тока через тело животного, введение в кровеносное русло воздуха (уколом в сердце или внутривенно) или в плевральную полость эфира (хлороформа).
Выбор метода диктуется видом животного и целями исследования, но наибольшее распространение в лабораторной практике получили первые два способа умерщвления.
Отсечение головы (декапитация) является основным способом умерщвления мелких лабораторных животных (лягушки, мыши, крысы) и осуществляется с помощью ножниц.
Для декапитации более крупных лабораторных животных (морские свинки, кролики, кошки, собаки) применяют специальные станки, в головной части которых имеется устройство с фиксацией головы и падающим на шею тяжелым ножом (гильотина).
Вскрытие лабораторных животных
После умерщвления тело животного быстро фиксируют в положении на спине. Лягушек, тритонов, мышей и других мелких лабораторных животных фиксируют на дощечках, восковых или пробковых пластинках (рис. 56), прикалывая за растянутые в стороны лапки. Для фиксации средних и крупных лабораторных животных используют специальные станки или же изготовленные для этих целей доски (оцинкованные или окрашенные с вбитыми по краям крючками или гвоздиками для привязывания конечностей).
Рис. 56.
Вскрытие лабораторного животного.
Техника вскрытия брюшной и грудной полостей для всех лабораторных животных одинакова. Однако у животных, имеющих шерстный покров, вначале следует иссечь достаточно широкий кожный лоскут, чтобы избежать загрязнения внутренних органов. Для этого, захватив и приподняв (с помощью хирургического пинцета) кожу нижней части стенки живота по средней линии, подрезают ножницами образовавшуюся складку по направлению к голове, срезая кожный лоскут на нужном протяжении.
Затем следует сменить ножницы (или очистить их от прилипшей шерсти) и удалить влажным тампоном шерсть, попавшую на образовавшуюся «дорожку».
Вскрытие брюшной полости. Нижнюю часть стенки живота приподнимают пинцетом по средней линии (чтобы не повредить органы), прорезают ножницами вход в брюшную полость, вводят туда одну из браншей (но обязательно тупую) и разрезают стенку кверху до грудины. Затем берут кровоостанавливающие зажимы, захватывают ими внутренние слои стенки живота вместе с брюшиной и отворачивают кнаружи, раскрывая брюшную полость.
Вскрытие грудной полости. Вскрытие производят двумя разрезами через реберные хрящи по обе стороны от грудины снизу вверх. Образовавшийся костнохрящевой лоскут удаляют.
У мелких лабораторных животных следует вскрыть одномоментно брюшную и грудную полости для обеспечения достаточно свободного доступа к внутренним органам, у крупных же вскрывать только ту полость, откуда необходимо брать органы для исследования.
