Окрашивание жиров и липидов, выявление железа - основы гистологии
Термин «липиды» собирательный. Им обозначают все жироподобные вещества, экстрагируемые растворителями жиров (бензин, эфир, хлороформ и др.).
В основе методов окрашивания лежат чисто физические процессы. Суть их заключается в том, что вещества, красящие жиры, хорошо в них растворяются и поэтому легко переходят из раствора в липиды.
Окрашивание Суданом III. Является наиболее распространенным методом выявления жира.
Приготовление раствора красителя. В 100 мл горячего 70% спирта засыпают 0,2—0,3 г порошка Судана III, несколько раз взбалтывают и ставят в термостат (при 58°С) на несколько часов, затем охлаждают и фильтруют.
Метод. 1. Замороженные срезы (из свежей или фиксированной в формалине ткани) на несколько минут переносят из воды в 50% спирт.
- Помещают в спиртовой раствор красителя на 15—30 мин (бюксы следует закрывать, так как испарение спирта приводит к выпадению осадков красителя).
- Быстро ополаскивают в 50% спирте.
- Промывают в дистиллированной воде.
- Подкрашивают ядра кислым гемалауном.
- Промывают и заключают в желатин или глицерин-желатин (обезвоживание в спиртах экстрагирует жиры).
Результат. Жировые вещества интенсивно оранжевого цвета, ядра —синие. Препараты выцветают сравнительно скоро, поэтому откладывать исследование не рекомендуется.
Окраска шарлахом. Красители: в смесь из 50мл ацетона и 50 мл 70% спирта засыпают 0,2—0,3 г шарлаха. Хорошо закрывают и взбалтывают. Полученный раствор перед употреблением фильтруют.
Метод. 1. Замороженные срезы из свежей или фиксированной в формалине ткани помещают в 50% спирт на 2—4 мин.
- Окрашивают в растворе красителя 2—3 мин.
- Быстро ополаскивают в 70% спирте.
- Промывают в воде.
- Подкрашивают ядра кислым гемалауном.
- Промывают в воде и заключают в глицерин или глицерин-желатин.
Результат. Жировые вещества оранжево-красные, ядра — синие.
Выявление железа методом с образованием турнбулевого синего
Железо может находиться в тканях как в свободном виде (неорганическое), так и в химической связи с молекулами органических веществ (гемоглобин эритроцитов). Гистохимическое исследование тканей на содержание железа производят при изучении пигментного обмена, особенно при заболеваниях, связанных с гемолитическими процессами в крови.
Метод основан на химической реакции между сульфидом железа и гексациано-ферратом калия, в результате которой образуется турнбулевый синий. Реакция специфична, надежна, препараты стойкие.
Метод (фиксация формалином, абсолютным спиртом, срезы замороженные, парафиновые, целлоидиновые).
- Поместить срезы из дистиллированной воды в 10% раствор сульфида аммония на 1—24 ч.
- Тщательно отмыть в нескольких порциях дистиллированной воды.
- Поместить в свежеприготовленную смесь из равных частей 20% раствора гексациано-феррата (3) калия и 1% раствора хлористоводородной кислоты на 10—20 мин.
- Тщательно ополоснуть в дистиллированной воде.
- Подкрасить ядра кармином.
- Промыть, обезводить, просветлить, заключить в бальзам.
Результат. Участки, содержащие железо, окрашены в интенсивно-синий цвет, ядра красные.
Примечание. Необходимо исключить применение в процессе работы металлических предметов. Посуду следует тщательно промыть слабой хлористоводородной кислотой, а затем дистиллированной водой, полученной из стеклянного аппарата (чтобы исключить следы металла). Раствор сульфида аммония должен иметь чистый желтый цвет и сохраняться не дольше 2—3 нед в хорошо закрывающейся посуде. При доступе воздуха появляется коричнево-желтое окрашивание, свидетельствующее об инактивации раствора.
