Окрашивание эластических волокон методом унны—тенцера, резорцин-фуксином - основы гистологии
Окрашивание эластических волокон методом Унны—Тенцера (фиксация по Буэну)
Метод позволяет отчетливо выявлять эластические волокна соединительной ткани. Можно использовать с одинаково хорошим результатом различные фиксаторы.
Раствор красителя: 1г орсеина растворяют в 100 мл 70° спирта. К этому раствору добавляют 1мл аптечной хлористоводородной кислоты (25%). Раствор пригоден к употреблению сразу после приготовления. Можно повторно использовать раствор, но больше 1 нед хранить его не следует.
Окрашивание
- Из дистиллированной воды срезы переносят в раствор красителя на 40—60 мин.
- Ополаскивают срезы в дистиллированной воде и 96% спирте.
- Дифференцируют в абсолютном спирте под контролем микроскопа.
При этом фон почти полностью обесцвечивается. После дифференцирования срезы просветляют в ксилоле и заключают в канадский бальзам. Если дифференцировка в абсолютном этиловом спирте не дает желаемых результатов, можно применить безводный метиловый спирт.
Время окрашивания тотальных препаратов (например, серозные оболочки) необходимо увеличить до 3—6,12 и даже 24 ч.
Для окрашивания ядер клеток срезы после окрашивания в растворе орсеина ополаскивают дистиллированной водой и подкрашивают гемалауном или другим гематоксилином.
Если материал был фиксирован в жидкости Буэна, ядра не докрашиваются, так как они и без того имеют красивый фиолетовый цвет.
Результат. Эластические волокна окрашены в коричнево-красный цвет, фон имеет слабо-розовый оттенок. Плохие результаты окрашивания свидетельствуют о плохом качестве орсеина. Часто приходится определять время окрашивания опытным путем.
Окрашивание эластических волокон резорцин-фуксином (метод Вейгерта) (фиксация — 12% формалин)
Рабочие растворы
Первый раствор: 0,5 г основного фуксина и 1 г резорцина растворяют в 50мл дистиллированной воды. Второй раствор: 2 г хлорида железа (3 + ) растворяют в 10 мл дистиллированной воды.
Первый раствор нагревают в эрленмейеровской колбе до кипения и постепенно прибавляют к нему второй раствор. Смесь, осторожно взбалтывая, осторожно кипятят в течение 5 мин, затем охлаждают и профильтровывают. Фильтрат выливают. Осадок вместе с фильтром после предварительного подсыхания переносят в чашку, заливают 70 мл 96% спирта и осторожно нагревают до кипения на водяной бане для растворения осадка. После этого остатки осадка на фильтре соскабливают в спирт. Раствор охлаждают, добавляют к нему 1 мл аптечной хлористоводородной кислоты (25%) и профильтровывают. Раствор можно применять сразу после приготовления. Он может храниться несколько месяцев.
Окрашивание
Из 80% спирта срезы переносят в раствор красителя на 20—30 мин.
- Промывают срезы в проточной воде 1—2 мин.
- Для обесцвечивания фона срезы дифференцируют в 96% спирте (под контролем микроскопа).
- Обезвоживают в абсолютном спирте, просветляют ксилолом, заключают в канадский бальзам. Нельзя использовать карбол-ксилол, так как карболовая кислота вызывает обесцвечивание.
Результат. Эластические волокна окрашиваются в черно-синий цвет.
Для подкрашивания ядер до окрашивания резорцин- фуксином используют квасцовый кармин или фуксинсерную кислоту.
