Окрашивание соединительной ткани азур эозином - основы гистологии
Фиксация: ценкер-формол по Максимову- несколько худшие фиксаторы 10% формалин, жидкость Ценкера, абсолютный спирт.
Это окрашивание является одним из лучших методов выявления клеточных элементов крови и соединительной ткани.
Рабочие растворы
Первый раствор — 0,1 г эозина растворить в 100мл дистиллированной воды- второй—0,1 г азура II растворить в 100 мл дистиллированной воды. Для приготовления растворов необходима очень чистая посуда и дистиллированная вода совершенно нейтральной реакции.
Смесь растворов готовят непосредственно перед окрашиванием. Для этого в чистом химическом стакане 10 мл первого раствора добавляют к 100 мл предварительно прокипяченной и охлажденной дистиллированной воды. Воду кипятят 5—10 мин в открытой плоскодонной колбе для удаления из воды углекислоты, которая является помехой для успешного окрашивания. Если этого мало, можно прибавить к 100 мл воды 1—2 капли слабого (1:1000) водного раствора гидрокарбоната натрия. Однако щелочная реакция воды также не годится.
К полученному раствору добавляют 10 мл второго раствора. При этом посуду, где происходит смешивание растворов, необходимо слегка покачивать. Готовый раствор темно-фиолетового цвета без хлопьев. Если же после смешивания растворов появляется хлопьевидный осадок, то раствор считается непригодным. Причиной чаще всего являются нечистая посуда и дефекты приготовления дистиллированной воды.
Видео: ТехникаМетодыизучения тканей
Окрашивание
- Срезы из прокипяченной дистиллированной воды помещают в раствор красителя на 12—24 ч (при комнатной температуре).
- Тщательно промывают в воде.
- Дифференцируют в 96% спирте (под контролем микроскопа). При появлении красной окраски эритроцитов дифференцировку прекращают.
- Срезы очень быстро обезвоживают в абсолютном спирте, затем помещают в чистый ксилол и заключают в бальзам.
Если эозин окрашивает срезы слабо, нужно удлинить дифференцировку в 96% спирте. В некоторых случаях можно увеличить содержание эозина в красящем растворе, например первого раствора 16 мл, второго — 8 мл, дистиллированной воды 80 мл.
Результат. Цитоплазма клеток окрашивается в различные оттенки синего цвета. Зернистость цитоплазмы красится различно: оксифильные зерна светло-красные, базофильные—темно-синие. Ядра клеток тоже темносиние. Гемоглобин приобретает ярко-красный цвет. При накоплении гемоглобина в цитоплазме клеток окраска меняется: чем больше гемоглобина, тем ярче розовая окраска цитоплазмы клеток.
