Заключение в водные среды - основы гистологии
Видео: Водная среда слайд-шоу
Видео: Основные источники загрязнения атмосферного воздуха планеты
В тех случаях, когда по условиям обработки препарат не может соприкасаться со спиртами, ксилолом и подобными растворами, его заключают в среду, содержащую воду (например, при окраске среза на жир проведение через спирты вызывает его растворение и вымывание). Как уже упоминалось, к таким средам относят глицерин, глицерин- желатин, гуммисироп Апати. Они обладают просветляющими свойствами.
Методика. Срез извлекают из воды, удаляют лишнюю влагу (обсушивая стекло вокруг препарата с помощью фильтровальной бумаги), накапывают несколько капель глицерина, теплого глицерин-желатина или гуммисиропа и накрывают покровным стеклом, как обычно. Гуммисироп и глицерин-желатин быстро загустевают, поэтому следует максимально сократить время между накалыванием раствора и покрытием препарата стеклом (густая среда плохо растекается, образуется толстый слой, что ухудшает оптические свойства препарата).
Так как нанесение глицерина на препарат, извлеченный непосредственно из воды, приводит к его сжатию, рекомендуется срезы из нежных тканей помещать вначале в промежуточные смеси (глицерин и вода в соотношении 1:5, 1:3 или 1 :1) и лишь затем заключать в чистый глицерин.
Следует помнить, что глицерин плохо сохраняет многие краски, в том числе и гематоксилин, поэтому употреблять его нужно по возможности реже.
Чаще применяют глицерин-желатин и гуммисироп.
Гуммисироп приготавливают, растворяя в 50 мл дистиллированной воды 50 г чистого гуммиарабика и 50 г сахара (при этом сосуд помещают в водяную баню). Для консервации смеси добавляют 0,5 г тимола.
Для приготовления глицерин-желатина берут 41 мл дистиллированной воды, засыпают 7 г желатина и оставляют для набухания в течение нескольких часов. Затем прибавляют 50 мл глицерина и 1 г концентрированной карболовой кислоты, нагревают в течение 10—15 мин, постоянно помешивая, после чего отфильтровывают через обычную или стеклянную вату. При комнатной температуре смесь представляет собой плотную массу, поэтому перед употреблением ее нужно подогреть в водной бане или термостате при 56—<60 °С.
После заключения препаратов в жидкие незастывающие среды (глицерин, гуммисироп и т. д.) необходимо производить их окантовку во избежание высыхания среды и сползания покровных стекол. Для этой цели используют различные лаки, парафин, целлоидин и др.
Хорошие результаты дает смесь ланолина с канифолью: 20 частей безводного ланолина умеренно нагревают в фарфоровой чашке в течение 15—30 мин (для удаления возможных остатков воды). Затем, продолжая нагревать добавляют 80 частей канифоли (по кусочкам) и растирают до получения прозрачной желтовато-коричневой массы. Полученную смесь разливают в формочки (жестяные баночки из-под вазелина и т. д.), где она застывает. Нагревать надо осторожно, так как смесь огнеопасна.
Препарат, подлежащий окантовке, тщательно вытирают, чтобы среда для заключения не выступала за края покровного стекла. После этого нагревают прямоугольно изогнутую металлическую проволоку (стеклянную палочку, глазной скальпель), отделяют кусочек массы и наносят по маленькой капле на углы покровного стекла, фиксируя его к предметному. Затем заделывают непрерывным кантом все стороны покровного стекла.
Если препарат не требует длительного хранения, то его обычно окантовывают парафином. Горячий парафин наносят кисточкой на край покровного стекла.
При окрашивании и заключении препарата необходимо придерживаться следующего правила: вначале окрасить и заключить один срез, проверить в микроскопе его качество и лишь после этого приступить к дальнейшей обработке остальных препаратов. Такой порядок позволяет своевременно устранить возможные погрешности (плохое окрашивание, недостаточное обезвоживание, загрязнение и др.) и обеспечить изготовление качественных препаратов.
