Выявление аргирофильных волокон, элементов нервной системы - основы гистологии
Выявление аргирофильных (ретикулиновых) волокон (фиксация —15% формалин)
Ретикулиновые волокна импрегнируют серебром (само название «аргирофильные» говорит о сродстве этих волокон к солям серебра). После серебрения ретикулиновые волокна приобретают черный или коричнево-черный цвет.
Для успеха импрегнации при всех способах серебрения срезов необходимо точно соблюдать прописи, а также чистоту реактивов и посуды. Необходимо иметь отдельную стеклянную посуду для импрегнации. Каждый стаканчик или пипетку надо использовать только для одних и тех же растворов. Металлические приборы при серебрении употреблять нельзя.
Перед работой посуду тщательно обрабатывают смесью бихромата калия с серной кислотой, промывают в проточной воде в течение 1 ч и ополаскивают дистиллированной водой. После работы посуду также тщательно моют и ополаскивают дистиллированной водой. Особенно внимательно следует обращаться со стеклянной палочкой для переноса срезов, если для каждого раствора нет специальной палочки. Хранить такую палочку надо в дистиллированной воде и перед употреблением вытирать и ополаскивать чистой дистиллированной водой. Кристаллический нитрат серебра должен быть совершенно белым (серебро розового, серого и черного цвета непригодно к употреблению).
Для приготовления растворов всегда пользуются свежей дистиллированной водой.
Рабочие растворы
Раствор аммиаката серебра. К находящимся в посуде с притертой пробкой 10 мл 10% раствора нитрата серебра прибавляют 2 мл 10% гидроксида калия. В результате образуется темно-бурый осадок гидрата оксида серебра. Затем к этой смеси, одновременно взбалтывая, добавляют по каплям концентрированный раствор аммиака до тех пор, пока осадок не исчезнет. Затем добавлением дистиллированной воды объем раствора удваивают, фильтруют.
Раствор перманганата калия 1%.
Раствор метабисульфита калия 2—3%.
Раствор железоаммониевых квасцов 2% (пригодны только прозрачные лиловые кристаллы).
Кроме того, необходимо иметь 10% раствор формалина, 0,1% раствор хлорида золота, 1% раствор тиосульфата натрия.
Техника импрегнации
Срезы освобождают от парафина, помещают на 1—2 мин в раствор перманганата калия, а затем 5 мин промывают в водопроводной воде. После этого срезы переносят на 1 мин в раствор метабисульфита калия (для обесцвечивания) и затем снова промывают в проточной водопроводной воде в течение 5—10 мин.
Далее необходимо подержать срезы 1 мин в 2°/о растворе железоаммониевых квасцов и затем в течение 3—5 мин промыть сначала в водопроводной воде, а затем в двух порциях дистиллированной воды по нескольку мин. Срезы переносят в раствор аммиаката серебра на 1 мин, после чего очень быстро ополаскивают дистиллированной водой.
Затем срезы на 5 мин помещают в раствор формалина, который разбавляют водопроводной водой в соотношении 1 : 9, промывают водопроводной водой в течение 5 мин.
После промывки срезы сразу погружают в раствор хлорида золота на 10 мин. Далее ополаскивают их дистиллированной водой и для восстановления серебра погружают на 1 мин в раствор метабисульфита калия.
Следующая манипуляция — помещение срезов в 1 °7о раствор тиосульфата натрия на 1 мин (не дольше!) для фиксации. После этого необходимо основательное промывание водопроводной водой. Проводят срезы через спирты, ксилол и заключают в бальзам.
Результат. Ретикулиновые волокна приобретают интенсивно черный цвет, коллагеновые —коричневый или черный, ядра клеток — коричневый цвет.
Выявление элементов нервной системы
Для выявления элементов центральной и периферической нервной системы обычно применяют различные способы импрегнации (серебром, золотом, осмием). Окрашивать тела нервных клеток и их отростки можно и метиленовым синим. Все эти методы имеют тот существенный недостаток, что являются эмпирическими. Поэтому лаборанту всегда надо быть готовым к тому, что даже при строгом соблюдении всех условий импрегнации она часто не дает желаемого результата. Здесь имеют значение многие факторы, которые иногда трудно учесть (качество фиксации, реакция и качество воды, свойства нервной ткани и т. д.).
Существует много модификаций импрегнации нервных клеток и волокон. Наиболее распространенным является метод Бильшовского — Грос.
Окрашивание хроматофильного вещества в цитоплазме нервных клеток (глыбки Ниссля) производят по методу, предложенному Нисслем. Мякотные оболочки нервных волокон окрашивают по методу Шпильмейера или осмируют. Элементы глии выявляют специальными методами:
1) методом Кахала (выявление макроглии)- 2) методом Белецкого (выявление микроглии).
Кроме указанных методов, всегда надо параллельно окрашивать срезы для обзорных целей гематоксилин- эозином, что позволяет увидеть взаимоотношения нервных элементов с окружающими тканями. Нервные клетки могут быть окрашены и другими методами, употребляемыми в гистологической технике.
