Комбинированные гистохимические методы (для полисахаридов и протеидов) - основы гистологии
Преимущество методов — выявление на одном срезе двух различных химических компонентов белковой и полисахаридной природы.
Комбинированный метод выявления полисахаридов (по Риттеру — Олессону)
(фиксаторы формалин, 10% формалин в 90% спирте- заливка в парафин)
Представляет собой сочетание двух методов — ШИК- реакции и метода Гале, что дает возможность выявлять в одном и том же срезе кислые мукополисахариды и мукопротеиды.
Метод. 1. Срезы депарафинировать и довести до воды.
- Обработать по методу Гале и перед докраской ядер провести ШИК-реакцию, а затем хорошо промыть в дистиллированной воде.
- Обезводить, просветлить, заключить в бальзам. Результат. Кислые мукополисахариды окрашены в синий цвет, мукопротеиды — в пурпурно-красный.
Комбинированный метод выявления белков и нейтральных полисахаридов
(фиксаторы — Карнуа, 10% формалин)
Применение данного метода обеспечивает одновременное выявление в срезах белка и нейтральных полисахаридов и удачно отражает структурную и химическую организацию исследуемых микроструктур.
Сущность метода состоит в том, что краситель процион связывается с некоторыми аминокислотными остатками белка, а ШИК-реакция окрашивает нейтральные полисахариды.
Рабочие растворы
Реактив Шиффа (способ приготовления см. с. 270). Сернистая вода (способ приготовления см. с.270). Раствор перйодата: 250 мг перйодата калия растворить в 100 мл теплой дистиллированной воды.
Раствор проциона голубого (по В. Б. Иванову): 100 мг фосфатного буфера pH 5,6.
Метод окрашивания (парафиновые срезы)
- Довести срезы до воды.
- Поместить на 10 мин в перйодат калия.
- Промыть в двух порциях дистиллированной воды.
- Поместить в реактив Шиффа на 20 мин.
- Промыть в трех порциях сернистых вод по 3 мин в каждой.
- Промыть в проточной воде в течение 30 мин.
- Ополоснуть в дистиллированной воде и перенести в 0,1% раствор проциона на 40 мин при температуре 50°С.
- Ополоснуть в двух порциях дистиллированной воды.
- Обезводить, просветлить, заключить в бальзам. Результат. Структуры, содержащие белок, окрашиваются в ярко-синий, а углеводы — в ярко-красный цвет.
