Ультратом - основы гистологии
Видео: ПИЩЕВОД. OESOPHAGUS. В световой микроскоп.
Видео: СЕЛЕЗЕНКА. SPLEEN. Срез в световой микроскоп.
Ультратом (основные принципы устройства и приготовления срезов)
Электронно-микроскопическая техника исследования биологических объектов с первых шагов столкнулась с трудностью получения достаточно тонких (10—30 нм) срезов изучаемых объектов. При большой толщине изображение одних структур как бы «накладывается» на изображение других и их изучение становится невозможным.
Преодолеть эту трудность позволяет техника ультратонкого резания. Для этой цели применяют специальные приборы — ультратомы. В нашей стране наибольшее распространение получили ультратомы Сумского завода и шведской фирмы «ЛКБ». Реже используют приборы австрийской фирмы «Рейхард» и чехословацкий прибор «Тесла» (рис. 73).
Главным принципом в работе большинства современных ультратомов является тепловое расширение металлического стержня, которое позволяет осуществлять микроподачу объекта к неподвижно закрепленному стеклянному ножу.
Рис. 73.
Ультратом.
1 — чугунная станина- 2 — микроскоп- 3— осветитель- 4 — несущий стержень- 5— столик для стеклянного ножа- 6 — пульт управления.
Приготовлению ультратонких срезов предшествует ряд подготовительных операций:
Видео: Эмбриология. 1. Прогенез. Начальный период: оплодотворение
- изготовление стеклянных ножей- их наиболее широко применяют в электронно-микроскопических лабораториях- изготавливают ножи непосредственно перед ультратомией на приборе «ножеделателе» из полоски стекла определенного сорта;
- приготовление опорных сеток для ультратонких срезов — нанесение на сетку пленки из формвара, коллодия, углерода;
3) подготовка к ультратомии. Этот этап носит название заточки блока: участку объекта, подлежащему резке на ультратоме, на специальном приборе пирамитоме придают форму четырехгранной усеченной пирамиды (с вершиной, имеющей форму трапеции).
Далее наступает наиболее ответственный момент — момент изготовления первого ультратонкого среза объекта. Для этого необходимо:
- включить ультратом;
- закрепить блок в блокодержателе;
- смонтировать на ноже ванночку для жидкости, на поверхность которой собирают срезы, закрепить нож в приборе в нужном положении;
- подвести режущую кромку ножа максимально близко к поверхности верхней грани заточенного блока (обычно это достигается методом «высвечивания блика» от осветителя ультратома на гладкой поверхности верхней грани блока);
- заполнить ванночку ножа жидкостью (чаще всего дистиллированной водой), вручную получить первый полный срез объекта;
- включить автоматический режим работы прибора на необходимую толщину срезов;
- полученные срезы смонтировать на опорную сетку и, осушив фильтром, поместить в контейнер для транспортировки и хранения сеток с ультратонкими срезами.
Полученные ультратонкие срезы требуют дальнейшей обработки (как и светооптические) с целью выявления необходимых структур объекта исследования. Для этого ультратонкие срезы на опорных сетках обрабатывают определенными растворами красителей. Наиболее часто для этой цели используют растворы свинца и уранилацетата.
В ряде случаев успех исследования зависит от сопоставления данных электронно-микроскопического и светооптического изучения, причем одних и тех же структур объекта. Для этой цели приготавливают полутонкие срезы толщиной 1—2 мкм (1000—2000 нм). Их можно получить как на ультратоме, так и на пирамитоме. Затем срезы монтируют на обычных предметных стеклах и окрашивают в соответствии с задачами исследования. Наиболее распространенной является методика окрашивания полутонких срезов водным раствором 1% метилового синего и 1% бората натрия (бура) (1 : 1).
Следует подчеркнуть, что выше изложены лишь общие принципы подготовки материала к исследованию в электронном микроскопе. Для более углубленного ознакомления с методами электронной микроскопии необходимо обратиться к специальной литературе. На наш взгляд, достаточно квалифицированно и в то же время доступно этот вопрос освещен в книге Б. Уикли «Электронная микроскопия для начинающего» (М., 1975).
