Выявление (суммарное) белков - основы гистологии
Видео: Презентация на тему "СТРОЕНИЕ БЕЛКОВ"
Видео: Видео. Экспресс определение доброкачественности мяса
Белки — природные полимеры аминокислот, входящие в состав подавляющего большинства клеточных и тканевых структур. С ним связаны пластические, энергетические, транспортные и ферментные процессы. Поэтому гистохимическое их выявление имеет важное значение для характеристики изменений, происходящих в клетках и тканях (как в норме, так и в патологии).
Из существующих методов наибольшее распространение получил метод суммарного выявления белков по Даниелли, который удачно модифицирован советским гистохимиком М. Г. Шубичем (1963).
Выявление белков (суммарное) по методу Даниелли (в модификации М. Г. Шубина)
(фиксаторы Карнуа, Бродского, 10% нейтральный формалин)
Сущность метода состоит в том, что гистологические препараты сначала подвергают действию трис-диазония розанилина (основного фуксина), который реагирует с многими аминокислотными остатками тканевых белков. Для усиления окраски их обрабатывают Н-кислотой, которая соединяется с реакционноспособными группами трисдиазония, уже связанного с белками. Интенсивность окраски определяется концентрацией белков в той или иной гистологической структуре.
Рабочие растворы
Двунормальный (2N) раствор хлористоводородной кислоты. К 20мл концентрированной хлористоводородной кислоты (плотность 1,19) добавляют 80 мл дистиллированной воды.
Раствор основного фуксина. Растворяют 4 г основного фуксина (марка «для фуксинсернистой кислоты») в 100 мл 2N раствора хлористоводородной кислоты (раствор можно хранить длительное время).
Водный раствор нитрита натрия.
Растворяют 4 г нитрита натрия (NaО2) в 100 мл дистиллированной воды (раствор можно хранить в холодильнике).
Основной раствор трисдиазония. В пробирку наливают 2 мл раствора основного фуксина и затем по каплям при постоянном покачивании пробирки добавляют 2 мл раствора нитрата натрия. Смесь в течение 30—60 с приобретает соломенно-желтый цвет.
Рабочий раствор трис-диазония. Добавляют 0,5 мл основного раствора трис-диазония к 100 мл дистиллированной воды, предварительно забуференной добавлением 20 мл ацетатвероналового или другого буфера pH 7,9 (рабочий раствор трис-диазония сохраняется в течение нескольких часов).
Насыщенный раствор Н-кислоты. Растворяют 1 г Н-кислоты в 50 мл ацетатвероналового или другого буфера pH 9,2.
Видео: Лекция 1.1 | Основные понятия в химии | Надежда Танцура | Лекториум
Метод окрашивания (парафиновые срезы)
- Довести срезы до воды.
- Поместить в рабочий раствор трис-диазония на 10—20 мин (более точное время инкубации подбирают опытным путем).
- Промыть в дистиллированной воде.
- Промыть в трех сменах ацетатвероналового или другого буфера pH 9,2 по 2 мин в каждой.
- Перенести в насыщенный раствор Н-кислоты на 15 мин.
- Тщательно промыть в дистиллированной воде.
- Обезвредить, просветлить и заключить в бальзам. Результат. Гистологические структуры окрашиваются в красно-фиолетовый цвет различной интенсивности.
