Опсонины - микробиология с техникой микробиологических исследований
Еще в первых своих исследованиях по фагоцитозу И. И. Мечников и Ж. Борде заметили, что фагоцитарная активность лейкоцитов выше в иммунной сыворотке, чем в нормальной. Этот вопрос был разрешен И. Г. Савченко и Райтом, которые на основании ряда опытов показали, что в сыворотке имеются антитела, стимулирующие фагоцитоз и действующие на бактерий. Эти антитела были названы опсонинами (opsono — приготовляю пищу). Если сыворотку нагреть, то опсонины разрушаются и она не стимулирует фагоцитоз. Если лейкоциты отмыть от сыворотки, то фагоцитоз также не наступит, так как при промывании удаляется опсонин.
Антитела — опсонины — действуют только в присутствии комплемента. Свойствами, опсонинов обладают и другие вещества иммунной сыворотки — бактериотропины. В отличие от опсонинов бактериотропины термостабильны.
Определение содержания опсонинов в сыворотке производится следующим образом. К взвеси лейкоцитов прибавляют культуру определенного микроба и исследуемую иммунную сыворотку- смесь ставят в термостат на 15—20 минут. Контролем служит смесь лейкоцитов, микробов и нормальной сыворотки. По истечении указанного срока из смеси делают препараты на стекле, подсушивают, фиксируют и окрашивают. Под микроскопом подсчитывают, сколько поглощенных бактерий приходится в среднем на один лейкоцит (при подсчете в 100 лейкоцитах). Полученная величина называется фагоцитарным числом и отражает степень фагоцитарной реакции при данных условиях опыта. Отношение фагоцитарного числа иммунной сыворотки к фагоцитарному числу нормальной является «опсоническим индексом», т. е. служит показателем иммунобиологических процессов и наличия в крови опсонинов. Опсонический индекс выше единицы является показателем благоприятной иммунной перестройки, индекс же ниже единицы свидетельствует о вялости фагоцитарного процесса. Опсонический индекс используется в диагностике некоторых инфекционных болезней (бруцеллез, сыпной тиф и др.) и в ряде случаев как показатель эффективности соответствующей иммунизации.
При микробиологической диагностике инфекционных заболеваний можно использовать иопсоно-фагоцитарную пробу. Реакция ставится следующим образом. В небольшую пробирку наливают последовательно 0,05 мл лимоннокислого натрия, 0,1 мл испытуемой сыворотки, 0,05 мл 2-миллиардной взвеси живых или убитых микробов. Пробирку ставят в термостат на 30 минут при температуре 37°, затем делают мазки, фиксируют спиртом, окрашивают по Романовскому—Гимзе в течение 20—30 минут и подсчитывают микробы, фагоцитированные 25 нейтрофилами. В зависимости от количества бактерий, поглощенных каждым нейтрофилов, оценивают фагоцитоз и вычисляют цифровой показатель (табл. 9).
Таблица 9
Учет опсоно-фагоцитарной пробы
Количество фагоцитированных микробов водном лейкоците | Оценка фагоцитоза | Количество | Вычисление цифрой вого показателя |
0 | 0 | 5 | 5X0=0 |
1—20 | + | 4 | 4X1=4 |
21—40 | + + | 6 | 6x2=12 |
41 и более | 4* 4* + | 10 | 10X3=30 |
25 | 46 |
Как это видно из табл. 9, цифровой показатель в данном примере равен 46. Максимальный показатель выражается цифрой 75 (фагоцитоз всех 25 лейкоцитов оценен тремя плюсами), а минимальный — нулем (фагоцитоз всех лейкоцитов оценен нулем).
