Энтеровирусы - микробиология с техникой микробиологических исследований
В эту группу входят вирусы незначительные по своим размерам. К энтеровирусам относятся вирус полиомиелита, Коксаки, ECHO, вирус ящура и др. Энтеровирусы составляют одну группу, так как обладают рядом общих свойств: морфология, малые размеры, наличие инфекционной РНК, устойчивость к эфиру, локализация в кишечнике больных людей и вирусоносителей (кишечные вирусы).
А. Вирус полиомиелита
Полиомиелит — острое инфекционное заболевание, преимущественно детского возраста. Встречается спорадически, а иногда в виде эпидемических вспышек. Название болезнь получила от греческого слова «полное», что значит серый. Полиомиелит — воспаление серого вещества спинного мозга.
Вирусная природа полиомиелита была доказана в 1909 г. К. Ландштейнером и Э. Поппером путем успешного заражения обезьян введением им эмульсии спинного мозга ребенка, погибшего от полиомиелита. У экспериментально зараженных обезьян главным симптомом заболевания являются параличи.
Работами ряда авторов установлено присутствие вируса в мозге, нервах, лимфатических узлах и выделениях больных (слизь верхних дыхательных путей, испражнения). Размеры частиц очень малы (8—17 ммк), форма вирусных частиц круглая или нитевидная (рис. 116). В последние годы вирус полиомиелита выделен в форме кристаллического протеина, обладающего инфекционными свойствами. Культивируется вирус полиомиелита в культуре клеток из почек обезьян и клеток HeLa, активно растущих в пробирке. Размножение вируса определяется по его цитопатогенному действию.
Антигенная структура вируса неодинакова. Установлено существование трех самостоятельных и различных иммунологических типов, из которых каждый создает иммунитет у людей и обезьян к гомологичному типу.
Вирус очень долго и хорошо сохраняется в глицерине, выносит холод и высыхание, но очень чувствителен к теплу: нагревание в течение получаса до 50° убивает его. Вирус полиомиелита нестоек по отношению к химическим дезинфицирующим веществам- его убивает 1% раствор фенола, 1 % раствор перекиси водорода, 1 % раствор марганцовокислого калия и др. 
Рис. 116. Вирус полиомиелита. Ув. 60 000.
Вирус стоек к кислоте желудочного сока (обнаруживается в испражнениях больных).
Кроме обезьян, экспериментальный полиомиелит получен также у крыс, хомяков и белых мышей.
Патогенез и клиника. Источником инфекции является больной человек, особенно заразительный в конце инкубационного и в разгаре острого периода болезни. Больные люди и вирусоносители выделяют вирус с испражнениями. Возбудитель полиомиелита кратковременно также находится на слизистой оболочке носоглотки больного (последние дни инкубации и первые дни болезни). Передается полиомиелит преимущественно алиментарным, а также воздушно-капельным путем. Имеются данные, подтверждающие передачу заразного начала через воду, молоко и мухами.
Входными воротами инфекции являются слизистые оболочки верхних дыхательных путей и пищеварительного тракта. Инкубационный период может продлиться от 2—3 дней до 3 недель. Заболевание начинается внезапным повышением температуры и общими инфекционными симптомами, к которым нередко присоединяются катаральные явления со стороны слизистых оболочек (ангина, кашель, насморк, боли в горле). Основной симптом заболевания появляется на 5-й день болезни и состоит в развитии параличей, преимущественно нижних конечностей.
При благополучных исходах параличи иногда проходят, но чаще остаются и делают детей инвалидами. В 10—15% случаев болезнь заканчивается летально.
Кроме описанной тяжелой формы полиомиелита (паралитической), встречаются еще две формы заболевания более легкие с благоприятным исходом: 1) абортивная и 2) непаралитическая (менингеальная).
Иммунитет. Перенесенное заболевание оставляет после себя прочный иммунитет. В крови переболевших обнаруживаются специфические нейтрализующие вирус иммунные тела. В механизме иммунитета антитела не играют существенной роли. Заболевание может наблюдаться у лиц с большим количеством антител.
Иммунитет при полиомиелите обусловлен, вероятно, не гуморальными, а иными, возможно, местными тканевыми факторами.
Микробиологическая диагностика. Испражнения больных и смыв из носоглотки при вирусоносительстве собирают в широкогорлые небольшие флакончики и доставляют в лабораторию в посуде со льдом или в 50% глицерине.
Из испражнений готовят 10% суспензию в физиологическом растворе, встряхивая их в колбе с бусами в течение 5 минут. Центрифугируют 30—40 минут, надосадочную жидкость отделяют градуированной пипеткой и на каждый миллилитр к ней добавляют по 1000 ЕД пенициллина и 500 ЕД стрептомицина для уничтожения фекальной микрофлоры.
Через 1—2 часа стояния при комнатной температуре заражают три пробирки с культурой ткани почечный эпителий обезьян или эмбриона человека, клетки Нер-2 и т. д.). В каждую из этих пробирок вносят по 1 мл взвеси фекалий и 1 мл питательной среды и ставят в наклонном положении в термостат на 1 час для контакта вируса с клеткой. После этого всю жидкость из пробирок удаляют, чтобы предупредить возможность повреждения клеток токсическими продуктами фекалий, и добавляют по 1,5 мл питательной среды. Ставят в термостат на 2—14 дней неподвижно или во вращающийся барабан. Во время вращения пробирок культура ткани постоянно
омывается питательной средой и освобождается от вредных продуктов обмена.
Наличие цитопатогенного эффекта (изменение формы клеток, появление зерен пигмента) указывает на присутствие вируса в исследуемом материале в тех случаях, когда цитопатогенный эффект сохраняется в последующих пассажах.
Носоглоточный смыв после обработки (0,2—0,5 мл) вносят в пробирку с культурой ткани в объеме 1,5 мл.
Для определения типа выделенного вируса культуральную жидкость, содержащую вирус, смешивают с сыворотками, содержащими антитела к вирусу I, II и III типов. Затем каждой смесью заражают культуру ткани. Если типовая сыворотка нейтрализует выделенный вирус, т. е. клетки культуры ткани остаются неповрежденными, можно считать, что от больного выделен вирус соответствующего типа.
Для подтверждения диагноза полиомиелита ставят реакцию нейтрализации парных сывороток больного (взятых в начале и через 1—2 месяца после начала болезни) с типовыми штаммами вируса. Прогретую в течение 30 минут при 56° сыворотку больного разводят раствором Хэнкса 1 : 4—1 : 64 и каждое разведение в количестве 0,25 мл смешивают со стандартной дозой вируса (100 цитопатогенных доз — 0,25 мл вируса полиомиелита) соответственно I, II и III типа. После часового контакта при комнатной температуре смесями заражают по две пробирки культуры ткани и помещают в термостат на 4—7—9 дней. Изменение цвета среды (с малинового на желтый) свидетельствует о наличии в исследуемой сыворотке антител, так как произошла нейтрализация вируса и клетки ткани, оставаясь жизнеспособными, дают изменение цвета индикатора в результате действия их продуктов обмена.
Для диагностики может быть применена и реакция связывания комплемента с антигенами из типовых штаммов вируса полиомиелита.
Специфическая профилактика и терапия. Специфическая профилактика полиомиелита основана на иммунизации населения вакциной. Первая вакцина была получена в 1953 г. Солком (США) из жидкой культуры I, II и III типов (на почечной ткани обезьяны), инактивированной формалином. В настоящее время в широких масштабах вошла в практику живая вакцина из живого, но ослабленного вируса (вакцина Сэбина), превосходящая по своей эффективности вакцину Солка.
С целью экстренной профилактики и для лечения применяют полиомиелитный гамма-глобулин, получаемый из сыворотки взрослых людей, содержащей повышенное количество антител против вируса полиомиелита.
Б. Вирусы Коксаки и ECHO
Вирусы Коксаки (Coxsackievirus) получили свое название по городу Коксаки (США), где впервые в 1948 г. выделены из испражнений больных детей с симптомами поражений центральной нервной системы.
Вирусы ECHO (Enteric cytopathogenen human orphans) — кишечные цитопатогенные человеческие вирусы — выделены в 1941 г. Дж. Эндерсом с сотрудниками.
Вирусы Коксаки и ECHO по эпидемиологическим данным близки к вирусу полиомиелита. Вместе с последним они образуют группу кишечных вирусов.
Вирусы Коксаки и ECHO широко распространены во многих странах. Их находят в кишечнике (реже в глотке) больных людей и вирусоносителей. Свыше 5% здоровых детей до 4 лет являются вирусоносителями. Вирусы также находят в сточных водах и у мух.
Вирусы Коксаки и ECHO относятся к мелким вирусам (от 20 до 30 ммк). В их химический состав входит белок и рибонуклеиновая кислота. Группа вирусов Коксаки делится на две подгруппы — А и В, в подгруппу А входят 24 серологических типа, в подгруппу В—6 серологических типов. Вирус ECHO включает около 30 серологических типов.
Заражение вирусами Коксаки и ECHO происходит так же, как и другими кишечными инфекциями, от больного человека или вирусоносителя, возможен и воздушно-капельный путь. Вирусы Коксаки вызывают острый инфекционный процесс (асептический серозный менингит, энцефалит, герпангина и другие процессы), обычно протекающий доброкачественно, исключая миокардит новорожденных (70% летальности).
Заболевания, вызываемые вирусами ECHO, также характеризуются разнообразной клинической картиной, но наиболее часто наблюдаются асептический менингит и вирусный энтерит.
При вирусологической диагностике исследованию подлежат испражнения, смывы из носоглотки, спинномозговая жидкость, которыми после обработки антибиотиками засевают культуру ткани для обнаружения цитопатогенного действия и заражают новорожденных мышей. Вирусы ECHO непатогенны для животных, но в культуре ткани вызывают цитопатогенный эффект. Различия в патологоанатомической картине погибших мышей позволяют определить подгруппу А или В вируса Коксаки. Вирус Коксаки А вызывает восковидный некроз скелетной мускулатуры. Вирус Коксаки В поражает центральную нервную систему, печень, поджелудочную железу и бурый жир.
Специфическая профилактика и терапия этих инфекций находится в стадии разработки.
В. Вирус ящура
Ящур — острое инфекционное заболевание, поражающее парнокопытных животных (крупный рогатый скот, коз. свиней) и иногда человека.
Вирус ящура содержится в ящурных пузырьках. Размеры частиц вируса очень малы, находятся в пределах 10—20 ммк. Культивируется вирус на среде, содержащей живые ткани эмбриона морской свинки. В антигенном отношении различают три типа вируса: О, А и С.
Резистентность. Вирус ящура устойчив к факторам внешней среды: в выделениях животных сохраняется до 3 месяцев, при температуре 37° остается жизнеспособным несколько дней. Нагревание при 55° быстро разрушает вирус. К глицерину и высушиванию очень устойчив.
Патогенез и клиника. Источником инфекции являются больные животные и в редких случаях — человек. Заражение человека происходит главным образом в результате употребления в пищу сырых молочных продуктов от больных животных, а также при уходе за ними.
Входными воротами инфекции являются слизистая оболочка и поврежденная кожа.
Инкубационный период равен 2—7 дням. Болезнь начинается общим недомоганием, головной болью, болями в крестце, ознобом, иногда рвотой. Температура вскоре достигает высоких цифр. На слизистой оболочке рта и зева появляются наполненные прозрачным содержанием пузырьки, которые лопаются и оставляют после себя язвочки. Подчелюстные железы увеличиваются, губы припухают, десны покрываются белым налетом, появляется обильное слюнотечение и неприятный запах изо рта. Длительность болезни 15—18 дней.
Иммунитет. Перенесенное заболевание оставляет после себя иммунитет по отношению к вирусу того типа, которым заболевание было вызвано. В крови переболевших обнаруживаются антитела, нейтрализующие вирус.
Микробиологическая диагностика. Для диагностики содержимое ящурных пузырьков вносят в скарифицированную кожу подошвы морской свинки. Через 1—4 дня у животного повышается температура, и появляется везикулярная высыпь на подошве зараженной лапки и на слизистой полости рта. Можно также поставить реакцию связывания комплемента с сывороткой больного.
Лечение — симптоматическое. В тяжелых случаях применяют биомицин и поливалентную иммунную сыворотку.
