Возбудитель туляремии - микробиология с техникой микробиологических исследований

Впервые заболевание туляремией было описано в Калифорнии в провинции Туляре, в связи с чем микроб, вызывающий данное заболевание, получил название Bact. tularense (описан Мак Коем и Чепином в 1912 г.).
Морфология и тинкториальные свойства. Возбудидитель туляремии представляет собой мелкую палочку (коккобактерия) размером 0,2X0,7 мк (рис. 93).
В организме человека и животных микроб образует нежную капсулу. Спор не образует, неподвижен. Грамотрицателен. Нередко наблюдается биполярная окраска.
Культуральные и биохимические свойства. Бактерии туляремии — аэробы. Оптимальная температура роста 37°. На простых питательных средах не развиваются. Хорошей средой для культивирования туляремийных бактерий является свернутая яично-желточная среда (3 части яичного желтка+2 части стерильного физиологического раствора). Пригоден также мясо-пептонны|й агар с цистеином, кровью и глюкозой (среда Френсиса). На плотных питательных средах через 48 часов пребывания в термостате появляются мелкие круглые, блестящие, напоминающие капельки росы, колонии. При сплошном росте образуется тонкий «шагреневый» налет, состоящий из мелких, несливающихся колоний. В жидких питательных средах палочки туляремии размножаются медленно и плохо (рост по поверхности среды, скудный).
Среда Френсиса. К агару (pH 7,3) добавляют 1 % цистина и 1 % глюкозы. Кипятят несколько минут. После охлаждения среды до 45—50° прибавляют 10% дифибринированной кроличьей крови. Проверяют среду на стерильность.
Лучшими средами для выращивания бактерий туляремии являются полужидкие среды: яичный желток (40%), смешанный с физиологическим раствором (60%) или 10% желтка и 90% физиологического раствора.
Биохимическая активность бактерий туляремии выражена слабо. Они сбраживают с образованием кислоты без газа ряд углеводов: глюкозу, мальтозу, иногда левулезу, маннозу и глицерин, чем отличаются от весьма сходных с ними бруцелл.

Рис. 93. Бактерии туляремии, а —в чистой культуре- б —в мазке из органа.
Не образуют индола, белки разлагают до сероводорода.
Резистентность. Палочки туляремии быстро погибают при прогревании выше 60°. Прямой солнечный свет убивает их в течение 30 минут. Высушивание в комнате бактерии переносят 25 дней. В воде выживают до 90 дней, на зерне — до 133 дней. Большинство дезинфицирующих растворов быстро оказывает губительное действие на бактерии (3% раствор лизола через 2—3 минуты, 1% раствор трикрезола через 2 минуты, 50% спирт через 5 минут).
Патогенность для животных и токсинообразование. К микробу туляремии чувствительны грызуны. Морских свинок и белых мышей можно заражать подкожным, накожным, внутрибрюшинным и пероральным введением микробов. Зараженные животные погибают от сепсиса в срок от 2 до 15 дней. На вскрытии обнаруживают увеличенные печень и селезенку и ближайшие к месту заражения лимфатические узлы. В печени и селезенке имеются многочисленные очажки некроза. В мазках из органов обнаруживают мелких бактерий, окруженных нежной капсулой.
Экзотоксина Francisella tularensis не образует.
Патогенез и клиника. Источником инфекции при туляремии являются водяные крысы, белки, зайцы, полевые мыши и другие грызуны. Могут болеть туляремией также собаки, кошки, волки, птицы, лошади, крупный и мелкий рогатый скот.
Людям туляремия передается несколькими путями: контактным — при соприкосновении с больными животными или их трупами (при вылове грызунов, снятии с них шкурок), алиментарным — через воду и пищевые продукты, которые могут быть инфицированы выделениями больных животных или их трупами, аспирациоиным — при вдыхании пыли, загрязненной палочкой туляремии, трансмиссивным — в основном через клещей и различных насекомых (блохи, мухи и др.).
Заражение туляремией происходит через кожу (поврежденную и неповрежденную) и слизистые оболочки.
У человека различают следующие клинические формы туляремии.
Группа А (формы туляремии с выраженным поражением кожи, слизистой оболочки и внутренних органов): 1) бубонная форма- 2) язвенно-бубонная-. 3) глазная- 4) ангинозно-бубонная- 5) форма туляремии с другими наружными поражениями.

Группа Б (формы туляремии с преимущественным поражением внутренних органов): 1) туляремия с преимущественным поражением дыхательных путей-. 2) туляремия с преимущественным поражением желудочно-кишечного тракта- 3) туляремия с поражением других органов.

Инкубационный период длится от 1 до 10 дней.
Болезнь начинается остро: повышение температуры, озноб, рвота, головная боль и ломота во всем теле.
При бубонной форме па коже в месте входных ворот инфекции поражений не отмечается. На 3—4-й день ближайшие лимфатические узлы увеличиваются и делаются болезненными. Образовавшиеся бубоны могут нагноиться. Тогда они вскрываются и образуются язвы, которые затем рубцуются.
Течение туляремии может быть острым (до 1—3 месяцев), затяжным (до года и больше) и рецидивирующим, когда переболевший туляремией чувствует себя практически здоровым, а затем, через 1—2 года, снова заболевает при отсутствии дополнительного заражения.
Иммунитет. В организме переболевших туляремией находят антитела (агглютинины, преципитины, антитела, связывающие комплемент). Перенесенная туляремия оставляет прочный и длительный иммунитет. Описаны случаи повторного заболевания туляремией. Советские исследователи Л. М. Хотеневер, Н. Г. Олсуфьев, И. Н. Майский и др. считают, что невосприимчивость при туляремии вначале носит характер нестерильного, а затем стерильного иммунитета.
Организм больного на протяжении инфекционного процесса в течение значительного времени по выздоровлении находится в состоянии аллергии, обнаруживаемом при введении тулярина (глицеринизированная взвесь убитых нагреванием Francisella tularensis).
Микробиологическая диагностика. Своевременное распознавание туляремии имеет большое противоэпидемическое значение, так как дает возможность немедленно принять меры к ликвидации этой легко распространяющейся инфекции. Материалом для исследования служит отделяемое вскрывшихся бубонов, пунктат из закрытых бубонов и кровь больных.
Выделить культуру пут^м непосредственного посева материала на питательные среды не представляется возможным. Поэтому для выделения бактерий туляремии пользуются биологическим методом, заражая исследуемым материалом животных, чувствительных к возбудителю данного заболевания.
Одновременно с посевом готовят мазки-отпечатки, окрашивают по Романовскому—Гимзе и микроскопируют. В мазках из органов бактерии туляремии располагаются внутриклеточно и скоплениями. Выделенный микроб идентифицируют по морфологическим, биохимическим и серологическим свойствам. Микробиологическая диагностика туляремии может проводиться в специальных лабораториях.
Серодиагностика туляремии заключается в постановке реакции агглютинации с диагностикумом Fr. tularensis. Реакцию можно поставить со 2-й недели заболевания. Разведение сыворотки больного делают от 150 до 1 800 (табл, 21). Учет реакции производят через 18—20 часов. Положительным результатом считается ясная агглютинация, полученная в разведении 1 100 и выше.
Таблица 21
Схема постановки развернутой реакции агглютинации для диагностики туляремии

Примечания: 1, Сыворотку, разведенную 1:25, наливают только в пробирки 1-ю, 2-ю и 6-ю, после чего 0,5 мл содержимого 2-й пробирки переливают в 3-ю пробирку и т. д., а из 5-й пробирки 0,5 мл выливают.
2. Таблица заимствована из руководства к практическим занятиям по микробиологии К. Д. Пяткина, Н. С. Марковой и Н. Д. Трофимовой.

Аллергическая реакция. В результате заболевания туляремией у человека развивается повышенная чувствительность к микробу туляремии. Это аллергическое состояние может быть обнаружено внутрикожной пробой. Для постановки аллергической пробы необходимо иметь аллерген тулярин. Тулярин представляет собой 3% глицериновую взвесь в физиологическом растворе Fr. tularensis, убитой нагреванием при 70° по 1 часу в течение 3 дней. Для накожной пробы 1 мл тулярина содержит 1 млрд., а для внутрикожной пробы—100 млн. микробных тел. При внутрикожной пробе вводят 0,1 мл тулярина, при накожной на скарифицированную кожу наносят и слегка втирают 1 каплк} препарата. При положительной реакции на месте введения тулярина через 3—6—10 часов появляется местная воспалительная реакция.