Аденовирусы - микробиология с техникой микробиологических исследований
Видео: Вирусологические исследования на уровне Европейских стандартов
Аденовирусы впервые были найдены в культурах ткани аденоидов в 1953 г. У. Роу с сотрудниками.
Аденовирусы имеют размер от 30—50 до 120 ммк, хорошо растут в культуре ткани человека, обезьяны, проявляя цитопатогенное действие. Группа аденовирусов состоит из 31 типа вирусов, выделенных от человека, и 12 типов, выделенных от обезьян. Вирус неустойчив к действию температуры- погибает при температуре 56° в течение 30 минут.
Вирус передается от человека к человеку воздушнокапельным путем. Входными воротами служат слизистые оболочки верхних дыхательных путей и конъюнктива глаза. Клинически заболевание проявляется в различных формах: атипичная пневмония, фарингит, конъюнктивит, фаринго-конъюнктивальная лихорадка, бронхит.
Для вирусологического исследования берется смыв из носоглотки, налет из зева, отделяемое конъюнктивы глаза и после обработки антибиотиками засевается в культуру ткани. Типирование вируса проводится реакцией нейтрализации типоспецифическими сыворотками в культуре ткани.
Вирус натуральной оспы
Возбудитель оспы является вирусом, диаметр которого находится в пределах 0,125—0,175 ммк.
Под микроскопом в мазках из содержимого оспенных и вакцинальных везикул и пустул обнаруживаются мелкие кокковидные элементарные тельца Морозова— Пашена, которые и представляют собой вирус оспы (рис. 117). Элементарные тельца можно наблюдать с помощью обычного микроскопа при окрашивании их специальными методами (серебрение по Морозову, Пашену и окраска по Романовскому). Наиболее точные представления о размерах и форме элементарных телец получены в последнее время с помощью электронного микроскопа (рис. 118).
В 1892 г. Г. Гварниери сделал наблюдения, что при прививке кролику в роговицу глаза оспенного материала (от человека) или вируса вакцины роговая оболочка через 48—72 часа мутнеет, а на гистологических срезах и мазках в клетках эпителия обнаруживаются крупные включения шаровидной формы (около 1—4 мк в диаметре). Появление в клетках включений Гварниери — специфический признак оспы (рис. 119). Оспенный вирус можно культивировать на хорионаллантоисной оболочке развивающегося зародыша курицы, и в тканевых культурах.
Патогенность для животных. Вирус натуральной оспы патогенен для большинства животных. Оспой болеют коровы, лошади, овцы, куры, обезьяны и другие животные. При экспериментальном заражении на месте прививки вируса обычно на коже возникает одна или несколько оспенных пустул.
По антигенным свойствам вирус натуральной оспы человека и вирус оспы рогатого скота (вирус вакцины) вполне сходны. Это позволяет применить вирус вакцины, как слабо патогенный, для вакцинации населения.
Рис. 117. Элементарные тельца Морозова — Пашена в оптическое
микроскопе.
Рис 118. Вирус натуральной оспы в электронном микроскопе: Н. Л. Утевский
Рис. 119. Включения Гварниери в клетках эпителия.
Патогенез и клиника. Источником инфекции является больной человек. Вирус оспы содержится в кожных пустулах, корочках и капельках слизи верхних дыхательных путей.
Инфекция может передаваться капельным путем, непосредственным контактом с больным и через инфицированные предметы (книги, игрушки, вещи больного и др.). Возбудитель оспы чаще всего проникает в организм человека через верхние дыхательные пути (нос и носоглотку).
Инкубационный период равняется 10—13, реже 5 дням. Местом первоначального размножения вируса является слизистая оболочка, преимущественно зева. Отсюда вирус на 8—9-й день после заражения попадает в кровь, дает начало генерализации процесса, оседает в коже и слизистых оболочках, в результате чего развиваются характерные оспенные поражения (папулы, везикулы, пустулы).
Болезнь начинается внезапным подъемом температуры до 39—40°, болями в затылочной и поясничной области и появлением рвоты. На 3—4-й день вирус исчезает из крови и оседает на коже, появляется сыпь, характерная для оспы. Температура при этом снижается. Когда кожные везикулы нагнаиваются, температура снова поднимается, гной подсыхает в корочки, появляется сильный зуд. На месте корок образуются рубцы, остающиеся на всю жизнь.
Летальность от оспы колеблется в пределах 15—30%. Встречаются, однако, очень тяжелые формы с геморрагической сыпью (черная оспа), при которых летальность может достигать 100%. В то же время известны легкие доброкачественные формы оспы, так называемые вариолоиды, среди лиц, вакцинированных против оспы и частично утративших невосприимчивость к инфекции за давностью времени иммунизации.
Иммунитет. Перенесенная оспа оставляет после себя стойкий иммунитет, обычно длящийся всю жизнь. Однако известны отдельные редкие случаи, когда заболевание повторялось через 20 лет. Прививочный иммунитет менее продолжителен и угасает в среднем через 7 лет.
В крови переболевших и привитых обнаруживают агглютинины, преципитины, нейтрализующие вирус и комплементсвязывающие антитела.
М. А. Морозов экспериментально доказал при изучении механизма прививочного иммунитета наличие специфического лизиса элементарных телец под действием гипериммунных сывороток in vitro и in vivo.
По мнению одних авторов, в основе иммунитета лежит действие антител. По мнению других, на первом месте стоит способность клеток и тканей разрушать вирус, приобретаемая ими после вакцинации.
Микробиологическая диагностика. Для диагностики оспы можно применить следующие методы:
- микроскопическое исследование содержимого везикул и пустул для обнаружения телец Морозова—Пашена;
- сделать посев крови или содержимого пустул в. культуру ткани или на хорионаллантоисную оболочку куриных эмбрионов. Вирус оспы в культуре ткани оказывает цитопатогенное действие, а на хорионаллантоисной оболочке образует белые бляшки;
- поставить реакцию связывания комплемента или торможения гемагглютинации (для обнаружения антител);
- провести люминесцентную вирусоскопию пустулезного материала.
Специфическая профилактика. Основным средством предохранения от оспы является вакцинация оспенным детритом.
Вакцинация состоит в прививке живого, но ослабленного проведением через животный организм вируса оспы в глицерине.
Для получения оспенного детрита в поверхностные насечки, сделанные скарификатором на выбритой, чисто вымытой и обеззараженной коже живота здорового теленка, втирают вирус вакцины (консервативный метод). По методу Гамалеи эти насечки делают на более обширной поверхности, захватывающей бока, спинку и грудь животного (интенсивный метод). На 5—6-й день, когда на месте насечек образуются гнойные пузырьки-пустулы, содержащие огромное количество размножившегося вируса, животное убивают, а содержимое пустул снимают острыми ложечками и растирают в специальных мельницах. Полученную массу смешивают с равным по весу количеством 80% глицерина и выдерживают 4—6 недель в леднике. Под действием глицерина попавшие с кожи теленка посторонние микробы отмирают, вирус же сохраняется живым, будучи устойчивым к глицерину.
Полученную массу (детрит) после обработки разливают по мелким прямым капиллярным трубочкам или ампулам и сохраняют на леднике. Оспенную вакцину после ее приготовления проверяют на наличие патогенных микроорганизмов и общую микрофлору.
Советскими учеными разработан ряд мероприятий, направленных на повышение эффективности вакцины. Вместо глицерина в качестве консерванта предложен куриный белок (М. А. Морозов). Благодаря этому препарат стал более теплоустойчивым.
Особенно важным достижением является получение сухой оспенной вакцины, обладающей исключительной теплоустойчивостью и продолжительным сроком годности — 1 год вместо 4—6-месячной годности, которой обладает обычная глицериновая вакцина. Сухая оспенная вакцина, приготовленная М. А. Морозовым и сотрудниками, представляет тонко измельченный соскоб вакцинальных оспин теленка, высушенный с помощью вакуум-рефрижератора в смеси с белковым консервантом.
