Санитарно-бактериологическое исследование продуктов на наличие стафилококка - микробиология с техникой микробиологических исследований
ИССЛЕДОВАНИЕ НА НАЛИЧИЕ СТАФИЛОКОККА
Стафилококки чаще всего встречают благоприятную для размножения среду в пищевых продуктах с большим содержанием белка и крахмала (молоко, кремовые изделия, мороженое, сыр, паштеты, отварная рыба, мясо, пюре картофельное, консервы рыбные под маслом).
Методика исследования. Продукты жидкой консистенции засевают на твердые питательные среды (1—2 капли) и в среды накопления (солевые) 0,5—1 мл. Продукты густой консистенции разводят стерильной водопроводной водой, твердые — размельчают и растирают с водой в ступке. Из приготовленной эмульсии, или болтушки готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют, отмечая наличие стафилококков (единичные, мало, много). Одновременно делают посевы в накопительные среды с содержанием 6,5 и 10% хлористого натрия и на чашку с желточно-солевым агаром (среда Чистовича).
Среда накопления 1
Мясо-пептонный бульон 1 л
Хлорид натрия 65 г
Агар-агар 1 »
Лактоза 15 »
Среда накопления 2
Мясо-пептонный бульон 1 л
Хлорид натрия 100 г
Агар-агар 1 »
Лактоза 15 »
pH 7,4. Стерилизуют при 120° 30 минут.
Среда Чистовича — желточно-солевой агар. Мясо-пептонный агар с 10% хлористого натрия, простерилизованного при 120° 30 минут, растопить, остудить до 45—48°, прибавить 20% по объему желточной взвеси (один яичный желток на 150 мл физиологического раствора), хорошо перемешать, разлить по чашкам. Среду можно готовить впрок и хранить в холодильнике.
Посевы ставят в термостат при 37° на 48 часов. В положительных случаях на чашках с желточно-солевым агаром патогенные стафилококки вырастают с образованием пигмента (штаммы, образующие пигмент любых оттенков оранжевого и кремового цвета следует считать золотистыми) и с зоной помутнения вокруг колонии (при наличии лецитиназы, разрушающей лецитин питательной среды). Такие колонии пересевают: 1) на чашки с кровяным агаром для изучения гемолизирующих свойств- 2) на скошенный агар для постановки через 16—24 часа реакции плазмокоагуляции- 3) в сахарный бульон (на 6 часов в термостат при 37°) для изучения морфологии (мелкие кокки, расположение гроздевидное).
Если через 24 часа па чашках с кровяным агаром не появился гемолиз, следует оставить их еще на 24 часа при комнатной температуре. При отсутствии гемолиза делают повторный пересев на кровяной агар, чашку с посевом помещают в эксикатор с содержанием 20% С02 и ставят в термостат при 37°. Через 24 часа роста в атмосфере С02 утраченные гемолизирующие свойства восстанавливаются. Для образования СО2 на дно эксикатора 1—2-литрового объема помещают чашечку с двууглекислой содой (1—2 г) и через оставленное отверстие тонкой пипеткой наливают 16—18 мл 10% соляной кислоты.
Со скошенного агара берут петлю культуры стафилококка и вносят в пробирку с разведенной 1 : 4 плазмой кроличьей или человеческой цитратной крови. Ставят в термостат при 37° и в течение 1 —10 часов наблюдают каждый час появление плазмокоагуляции. В тех случаях, когда на чашках с желточно-солевым агаром (ЖСА) нет роста подозрительных колоний стафилококка, делают пересев из сред накопления на чашку с желточно-солевым агаром и продолжают анализ по вышеописанной методике.
При обследовании продуктов в плановом порядке можно ограничиться определением основных свойств стафилококка по приведенной схеме. В случаях же пищевых отравлений производится более детальное изучение выделенных штаммов стафилококка, т. е. определяют наличие энтеротоксина и степень гемолитической активности.
Биологическая проба описана в разделе «Частная микробиология» (стр. 202), но можно поступить и следующим образом. Выделенный штамм стафилококка засевают на чашки с 0,75% агаром на телячьем бульоне или на бульоне Хоттингера с 0,25% глюкозы (pH 7,0). Чашки помещают в эксикатор с 20% С02 и ставят в термостат при 37° на 2 суток вверх дном. Через 48 часов вынимают и на поверхность агара наливают 10 мл физиологического раствора. Агар раздавливают шпателем до кашицеобразной консистенции и оставляют при комнатной температуре на 2 часа. После этого экстракт переносят в пробирки и центрифугируют до получения прозрачного слоя, который отсасывают. Прогревают в кипящей водяной бане в течение 30 минут и вводят кошкам в вену уха или бедренную вену в количестве 0,5 мл на 1 кг веса. Появление рвоты и поноса или только рвоты, наступившей в период от 30 минут до 3 часов, указывает на присутствие энтеротоксина. Или берут 12—2-месячных котят и вводят натощак пипеткой в рот 15—20 мл негретого токсина, смешанного с молоком или кремом. Через 30—60 минут наступает рвота, иногда понос и общая прострация. Наблюдение ведется 4—5 часов. Можно ввести токсин белым мышам через зонд в пищевод.
Для окончательного подтверждения роли выделенного стафилококка в этиологии данной пищевой интоксикации необходимо поставить реакцию агглютинации с сывороткой крови больного. В качестве антигена берут выделенный штамм стафилококка. Реакция ставится по типу реакции Видаля, начиная с разведения 1 : 50 до 1 : 800. В качестве контроля желательно поставить реакцию агглютинации с заведомо известным токсичным штаммом.
В последнее время производят фаготипирование патогенных стафилококков, позволяющее установить тождество культур, выделенных из различных объектов и от разных лиц, что имеет большое значение для санитарной службы.
