Санитарно-бактериологическое исследование почвы - микробиология с техникой микробиологических исследований
Изучение степени загрязнения почвы населенных мест, полей орошения и огородов проводится в основном бактериологическим методом исследования.
Бактериологическая характеристика санитарного состояния почвы основывается па определении общего числа микробов в 1 г почвы, титра кишечной палочки и наличия Gl. perfringens, Bact. proteus.
По эпидемиологическим показаниям проводится определение наличия в почве патогенных микроорганизмов (тифо-паратифозной группы, дизентерийной группы, столбнячной палочки и палочки ботулизма).
Основным показателем санитарного состояния почвы является титр кишечной палочки, поскольку наиболее часто почва загрязняется содержащими различные патогенные микроорганизмы фекалиями людей и животных.
Выбор места для забора проб почвы определяется санитарным врачом и бактериологом с учетом задания и цели исследования.
Для бактериологического исследования поверхностных слоев почвы на глубине от 1—2 до 20 см стерильной ложкой берут 200—300 г почвы и помещают в стерильную банку или колбу. Если требуется исследовать более глубокие слои почвы, то пробы берут на заданной глубине, пользуясь для этой цели специальным буравом. Средняя проба почвы составляется из нескольких образцов почвы, взятой на изучаемом участке. Взятые пробы перемешивают в стерильной посуде стерильной ложкой и из общей массы берут 200—300 г в стерильную посуду. В лаборатории взятую пробу почвы освобождают от всякого рода включений (корни, камешки, щебень и т. д.), после чего берут навеску почвы 30 г и делают ряд разведений. Первое разведение 1 : 10 получается при добавлении к 30 г почвы 300 мл стерильной дистиллированной воды. Хорошо взбалтывают в течение 10 минут и из полученной суспензии делают последующие разведения (1 : 100, 1 : 1000 и т. д.).
Для чистых почв делают 3—4 разведения, для загрязненных— 4—6 разведений.
Для определения общего числа бактерий поступают следующим образом. Из каждой пробы почвы берется не менее 2 разведений для посева. Каждое разведение в отдельности засевают параллельно на 2 чашки Гейденрейха—Петри с мясо-пептонным агаром. В стерильные чашки заранее наливают по 1 мл приготовленной разведенной суспензии почвы, а затем в эту чашку наливают 15 мл расплавленного и остуженного мясо-пептонного агара, хорошо перемешивают, дают агару застыть и ставят в термостат при 28—30° на 48 часов. По истечении срока инкубации подсчитывают общее число выросших колоний. Для подсчета колоний надо брать такие разведения, при которых на чашках вырастает от 50 до 150 колоний. Из суммы колоний, выросших на двух чашках одного разведения, выводят среднеарифметическое
число и затем подсчитывают количество колоний, приходящихся на 1 г почвы.
Пример. Посеяно 1 мл почвенной суспензии из разведения 1 10 000. На всей площади чашки выросло 80 колоний. Число выросших колоний надо умножить на степень разведения, получается число микроорганизмов в 1 г почвы: 80x10 000 = 800 000 бактерий.
Для определения титра кишечной палочки делается посев различных разведений почвы в сосуды со средой Кесслера.
При анализе чистых почв посев делают из основного разведения 1 10 до 1 1000. При работе с загрязненными почвами используют разведения до 1 100 000. Из исходного разведения (1 10) берут стерильной пипеткой 10 мл и засевают в колбу с 50 мл среды Кесслера, что соответствует 1 г почвы. Посев меньших количеств (0,1 — 0,01) делают по 1 мл из соответствующих разведений почвенной суспензии в пробирки с 9 мл той же среды. Посев выращивают в термостате при 43° в течение 24 часов. При отсутствии термостата на 43° посев можно выдерживать при 37° В случае задержки роста посевы оставляют в термостате еще на 24 часа. Дальнейший ход анализа почвы из забродивших сосудов проводят по общепринятой методике исследования воды.
Для вычисления коли-титра и коли-индекса пользуются таблицами расчета, составленными для исследования воды открытых водоемов. При этом надо пользоваться посевами из следующего расчета (табл. 35).
О степени загрязнения почвы можно судить по табл. 36.
Для исследования почвы па наличие в ней тифозных, паратифозных и дизентерийных микробов поступают так: почвенную суспензию после ее приготовления и последующего отстаивания около 1 минуты осторожно сливают с осевшего осадка в другой стерильный сосуд для освобождения от грубых механических примесей. Для концентрации микробов к 500 мл почвенной суспензии добавляют 2 мл 10% стерильного раствора соды (Na2C03) и затем 1,7 мл 10% стерильного раствора сернокислой окиси железа — Fe2(S04)3. Размешивают и оставляют на холоду на 1 час. Образовавшиеся после коагуляции хлопья оседают на дно сосуда вместе с частицами почвы и бактериями.
Таблица 35 Ориентировочный анализ объема 1- 0,1- 0,01 и 0,001 мл
1 | 0,1 | 0,01 | 0,001 | Коли-индекс | Коли-титр |
Менее 900 | Более 1,11 | ||||
— | — | — | — | 900 | 1,11 |
— | — | + | — | 900 | 1,11 |
— | + | — | — | 950 | 1,05 |
— | — | + | + | 1 800 | 0,56 |
— | + | — | + | 1 900 | 0,53 |
— | + | + | — | 2 200 | 0,46 |
— | — | 2 300 | 0,43 | ||
— | + | + | + | 2 800 | 0,36 |
+ | — | — | + | 9 200 | 0,11 |
+ | — | + | — | 9 400 | 0,10 |
+ | — | + | + | 18 000 | 0,06 |
+ | + | — | — | 23 000 | 0,04 |
+ | + | — | + | 96 000 | 0,01 |
+ | + | + | 238 000 | 0,004 | |
+ | + | + | + | Более 238 000 | Менее 0,004 |
Таблица 36
Санитарная оценка степени загрязнения почвы
Почва | Число бактерий в 1 г почвы | Титр кишечной палочки в г |
Относительно чистая | Не более 10 000 | 1,0 и выше |
Умеренно загрязненная | Сотни тысяч | 1,0—0,1 |
Сильно загрязненная | Миллионы | 0,01—0,001 и ниже |
Осадок после коагуляции засевают в количестве 0,5—1 мл на чашки со средой Плоскирева, Левина или Эндо. Оставшийся осадок почвенной суспензии заливают 50 мл 10% желчного бульона. Посевы выращивают в термостате при 37°. Дальнейший ход исследования проводится по общепринятой методике для каждого вида микроба.
