Цитогенетические методы исследования - практические навыки педиатра
Видео: Практические навыки ТГМУ 2016 6 курс
Видео: Исследование дыхательных движений
Из цитогенетических методов для клинической практики большое значение имеют исследования кариотипа и определение полового хроматина.
Исследование кариотипа. Кариотип изучают в культуре клеток, выращенной in vitro. Для стимуляции перехода лейкоцитов в митотическое состояние применяют фитогемагглютинин (2 капли на 8—10 см3 периферической крови, вводимой в культуру). В фазе митотической активности клеток для фиксации хромосом материал обрабатывают колхицином (в концентрации 50*10-9 М). Последующая обработка материала гипотоническим раствором вызывает набухание области ядра и способствует разбрасыванию хромосом в цитоплазме, что облегчает изучение их числа и структуры при микроскопии. Кариотип исследуется обычно в специализированной цитогенетической лаборатории.
Определение полового хроматина. Половой хроматин — это хроматиновое тельце в форме треугольника или полулуния, находящееся в ядрах разных типов клеток. Основание треугольника или полулуния чаще располагается на ядерной мембране, а вершина или выпуклость обращена к центру ядра. У лиц женского пола в клетках эпителия слизистой оболочки рта хроматин обнаруживается в 20—70 % ядер, тогда как у мужчин — от 0 до 5 %.
Считают, что половой хроматин представляет собой одну из Х-хромосом, находящуюся в относительно неактивном состоянии (тельце Барра).
Рис. 17. Половой хроматин (тельце Барра) обозначен стрелкой.
Половой хроматин легко выявляется при окраске любым из основных ядерных красителе. Его можно обнаружить в тканях организма, клетках кожи, слизистой оболочки рта, волосяных луковиц, крови и др.
Чаще всего половой хроматин определяют в клетках слизистой оболочки щеки. Для этого металлическим шпателем делают соскоб с внутренней поверхности щеки и полученный клеточный материал тонким равномерным слоем наносят на предметное стекло. Для окраски мазка используют одну каплю 1,5 или 2 % раствора уксуснокислого ацетоорсеина. Препарат накрывают покровным стеклом, осторожно фильтровальной бумагой удаляют излишек краски, и через 2—3 минут препарат готов для микроскопирования.
Для приготовления раствора красителя берут 1,5 или 1 г орсеина и растворяют в 45 мл ледяной уксусной кислоты. Раствор нагревают до появления паров и добавляют 55 мл дистиллированной воды, после чего охлаждают и фильтруют.
При отсутствии орсеина А. М. Захаров предложил использовать красители тиозиновой группы: метиленовый синий, азур 1. Для окраски 20—50 мг одного из указанных красителей растворяют в 10 мл дистиллированной воды. Окраска производится 2—3 каплями раствора.
Подсчет полового хроматина производят под микроскопом марки МБИ-3 или МБИ-6 с иммерсионными объективами. Подсчитывают не менее 100 ядер, у которых ровные контуры, гладкая оболочка и половой хроматин прилегает к ядерной оболочке (рис. 17).
Исследование полового хроматина (Х-хромосом) помогает в диагностике таких хромосомных аномалий по половым хромосомам, как синдромы Шерешевского —Тернера
(45 ХО), Клайнфельтера (47 XXY), трисомия X (47 XXX). Выявленное при исследовании число полового хроматина в ядре клетки позволяет судить о количестве Х-хромосом, которых всегда на единицу больше, чем обнаруженных телец хроматина.
