Исследования мочевого осадка - практические навыки педиатра
Видео: "Лаборатория и нефролог. Совместная трактовка результатов общего анализа мочи и осадка"
Видео: Микроскопия организованного и не организованного осадка MedST org
КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА ЭЛЕМЕНТОВ МОЧЕВОГО ОСАДКА
Количественная оценка элементов мочевого осадка широко внедрена в педиатрическую практику по отношению к органическим элементам. Определение в осадке количества эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров, клеток Штернгеймера—Мальбина, активных лейкоцитов имеет диагностическое и дифференциально-диагностическое значение.
Метод Каковского—Аддиса. Мочу собирают в течение 12 ч. Накануне исследования, для того чтобы моча была более концентрированная и имела кислую реакцию (а это сохраняет клетки крови, попавшие в мочу, от разрушения), ребенок должен принимать белковую пищу и меньше пить. Вечером перед сном ребенок должен опорожнить мочевой пузырь. При этом важно точно отметить время. Затем в течение 12 ч (при естественном желании ребенка помочиться) мочу собирают в сосуд.
Для консервации мочи в нее добавляют кристаллик тимола или несколько капель трикризола. Утром ребенок мочится последний раз (опять следует отметить время), после чего моча подлежит исследованию Собранную мочу перемешивают, измеряют ее количество и 10 мл наливают в градуированную центрифужную пробирку. Центрифугируют мочу 10 минут при 1500 об/мин, затем пипеткой снимают 9 мл надосадочной жидкости. В оставленном 1 мл мочи суспензируют осадок и каплю суспензии помещают в камеру Горяева. Под микроскопом при среднем увеличении отдельно подсчитывают эритроциты и лейкоциты обычно в 15 больших квадратах. Цилиндры подсчитывают при малом увеличении в 150 больших квадратах. Результаты подсчета делят на 10 (число миллилитров мочи, из которой получен осадок при центрифугировании), затем умножают на 1000 (для перевода кубических миллиметров в кубические сантиметры) и еще на 2 (для пересчета на суточную мочу).
Быстрый расчет можно произвести по формуле v4 = ЛГ - 1 000 000 (для эритроцитов и лейкоцитов) и А = X • 100 000 (для цилиндров), где А — количество эритроцитов, лейкоцитов или цилиндров, выделенных за сутки- X — количество сосчитанных эритроцитов, лейкоцитов, цилиндров.
В норме при количественном исследовании элементов осадка по Каковскому—Аддису у детей за сутки выделяется около 2 млн лейкоцитов, 1 млн эритроцитов и 20 тыс. цилиндров.
Метод Амбурже. Отличается от описанного выше тем, что мочу собирают за 3 ч (примерно с 8 до 11 ч). После определения элементов осадка в камере Горяева рассчитывается, сколько их выделяется в минуту. В норме при сборе мочи по методу Амбурже за минуту у мальчиков выделяется не более 1500 лейкоцитов и 1000 эритроцитов, у девочек соответственно до 2000 и 1000.
Метод Нечипоренко. Используется обычно при затруднениях в сборе мочи за тот или иной промежуток времени. Для исследования берут свежесобранную мочу, 5—10 мл се центрифугируют и в осадке, как было показано при описании метода Каковского—Аддиса, подсчитывают форменные элементы и цилиндры. Пересчет ведется на 1 мл мочи. У здорового ребенка в 1 мл свежесобранной мочи содержится не более 2000 лейкоцитов и 1000 эритроцитов.
Увеличение количества лейкоцитов в моче при исследовании осадка характерно для микробно-воспалительных заболеваний органов мочевыделения (пиелонефрит, цистит, пиелоцистит и др.). Увеличение числа эритроцитов выше указанных норм при относительно низком содержании лейкоцитов наблюдается при диффузном заболевании почек инфекционно-аллергического генеза, наследственных нефропатиях, туберкулезе почек, мочекаменной болезни.
Видео: Vision Hema® Ultimate — Автоматический гематологический сканер-анализатор
ЦИТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ МОЧЕВОГО ОСАДКА
Методы цитологического исследования мочевого осадка применяются для установления диагноза при латентно текущих формах нефрита. В таких случаях бывает трудно определить, какой процесс лежит в основе болезни: микробно-воспалительный или инфекционно-аллергический.
Для цитологического исследования берут свежую утреннюю мочу слабокислой реакции. Для концентрирования осадка 10 мл мочи разливают в 5 центрифужных пробирок и центрифугируют при 1000 об/минут в течение 2—3 мин. Затем, осторожно сняв надосадочную жидкость, осадок из всех пробирок сливают в одну и вновь 2—3 минут центрифугируют при 1000 об/мин. Полученный осадок суспензируют в нескольких каплях надосадочной жидкости с добавлением 2—3 капель сыворотки. Полученную суспензию наносят на предметные стекла, готовят мазки, фиксируют их на протяжении 5 минут в метиловом спирте, высушивают и красят по Романовскому—Гимзе. Готовые мазки микроскопируют под иммерсией. Для выведения лейкоцитарной формулы подсчитывают 100— 300 лейкоцитов. Если в основе болезни лежит микробно- воспалительный процесс, в лейкоцитарной формуле преобладают нейтрофилы (до 75 %), при гломерулонефрите обнаруживается большое количество мононуклеаров, а при наследственном нефрите — лимфоцитов.
Определение клеток Штернгеймера—Мальбина. Это один из методов диагностики, с помощью которого можно дифференцировать латентно протекающие микробно-воспалительные процессы в почках и мочевых путях (пиелонефрит, цистит и др.) и диффузные заболевания почек. Клетки Штернгеймера—Мальбина велики по размерам, имеют овальную, круглую или грушевидную форму.
Протоплазма их почти бесцветная, содержит серые гранулы, совершающие броуновское движение. Ядра при окраске красящим раствором Штернгеймера—Мальбина принимают бледно-синий либо бледно-фиолетовый цвет.
Для исследования в центрифужную пробирку помещают 5—10 мл свежей утренней мочи и центрифугируют в течение 2—3 минут при 1000 об/мин. К полученному осадку добавляют 1—2 капли красящего раствора Штернгеймера —Мальбина, размешивают и одну каплю суспензии наносят на предметное стекло. Каплю покрывают покровным стеклом и микроскопируют при масляной иммерсии.
Красящий раствор Штернгеймера—Мальбина готовится заранее и может храниться в лаборатории до трех месяцев. Он состоит из растворов № 1 и № 2. В раствор № 1 входят генциан-фиолетовый — 3 г, этиловый спирт 95 % — 20 мл, щавелевокислый аммоний — 0,8 г, трижды дистиллированная вода — 80 мл. Раствор № 2 содержит сафранин — 0,25 г, этиловый спирт— 10 мл, трижды дистиллированную воду — 100 мл. Оба раствора смешивают в пропорциях: раствора № 1 — 1 часть и раствора № 2 — 97 частей.
Клетки Штернгеймера—Мальбина представляют собой видоизмененные гранулоциты, разбухшие при низком осмотическом давлении мочи, они встречаются на далеко зашедших стадиях пиелонефрита.
Определение активных лейкоцитов (по В. С. Рябинскому и В. Е. Родоману). При понижении осмотического давления мочи проникновение воды в активные лейкой циты усиливается, что ведет к увеличению их размеров в 1.5—=2 раза и подвижности гранул протоплазмы. Для выявления активных лейкоцитов к осадку мочи добавляют каплю дистиллированной воды и каплю насыщенного раствора краски сафранина или эозина. Эти лейкоциты активно впитывают воду. Сафранин в них не проникает, и они остаются бледно-серыми, тогда как «мертвые» лейкоциты окрашиваются. Препарат рассматривают под микроскопом при увеличении в 40 раз или с иммерсионной системой. Подсчитывают число активных клеток на 100 лейкоцитов. При пиелонефрите выявляется 70—80 % активных лейкоцитов. При других заболеваниях почек их количество не превышает 10%.
Для более достоверной диагностики микробно-воспалительных заболеваний мочевой системы (пиелонефрит, пиелит, пиелоцистит) важно убедиться в участии в патологическом процессе инфекции. Бактериологическое исследование требует получения мочи с помощью катетера и представляет собой длительный процесс. В связи с этим были предложены методы выявления истинной бактериурии с помощью химических проб.
Реакция на нитриты. Под влиянием жизнедеятельности бактериальной флоры добавленные в мочу нитраты переходят в нитриты. Обнаруживают их следующим образом: к 1 мл мочи прибавляют 0,04 мл раствора калия нитрата, после чего пробу инкубируют в термостате в течение 4— 6 ч при температуре 37 °С. Затем к пробе прибавляют несколько мл смеси, состоящей из растворов А и Б. В раствор А входят сульфаниловая кислота — 1,25 г, уксусная кислота 30% — 500 мл- в раствор Б: альфанафтиламин—2,5 г, уксусная кислота 30% — 500 мл. Реакция считается положительной (указывающей на наличие в моче нитритов) при появлении красного или розового окрашивания.
В норме у здоровых детей и взрослых число бактерий в 1 мл мочи не превышает 100 000. При инфекции мочевых путей бактериурия более выражена.
Определение патологической бактериурии по ускоренной реакции на нитриты. Для реакции готовят свежий реактив Касаткина, который состоит из риванола в разведении 1:1000 и хлористоводородной кислоты — 12 % раствор.
Свежую утреннюю мочу в количестве 1 мл помещают в стерильную пробирку и прибавляют одну каплю 5 % раствора калия нитрата. Пробу помещают в термостат на 6 ч при температуре 30 °С, затем добавляют 0,2 мл риванолового реактива. Появление розовой окраски свидетельствует о том, что в 1 мл мочи содержится 100 000 и более микробных тел.
