Гистохимия, тканеспецифические маркеры опухолей - общая онкология

Гистохимия опухолей.

Хотя большинство опухолей может быть диагностировано при исследовании окрашенных гематоксилином и эозином срезов материала, залитого в парафин, существует много примеров получения ценной информации о типе, гистогенезе и функциональной активности опухоли при использовании специальных методик. Среди них наибольшего распространения получила гистохимия. Современная гистохимия является важным методом морфологического исследования, дающим представление о локализации химических веществ в определенных компонентах тканей, типах клеток и клеточных структурах, а также о функционально-метаболическом состоянии клеток и тканей при сохранении их структуры [Moglichkeiten und Grenzen..., 1984]. В ее арсенале имеется множество реакций, позволяющих выявить различные классы веществ: белки (реакция с динитрофтор- бензолом), углеводы (ШИК-реакция), нуклеиновые кислоты (окрашивание метиловым зеленым — пиронином), липиды (окрашивание Суданом черным В). Применение гистохимического метода во многих случаях помогает решить трудную проблему дифференциального диагноза. Так, например, положительная окраска на слизь (муцин) подтверждает эпителиальную природу недифференцированной опухоли. Наличие же большого количества гликогена в клетках недифференцированной круглоклеточной опухоли кости у детей скорее говорит в пользу саркомы Юинга, чем ретикулосаркомы или метастатической нейробластомы. Окраска на ретикулин помогает выявить сосудистые новообразования и т. д. 

Тканеспецифические маркеры опухолей.

С развитием методов иммуногистохимии началась новая эра в практике гистологического исследования. Являясь высокочувствительными и специфичными, эти методы, использующие комплексы антиген — антитело, способствовало обнаружению ранее невыявляемых клеточных компонентов, что позволило найти им широкое применение в диагностике опухолей человека. На смену применявшегося долгое время иммунофлюоресцентного метода, имеющего ряд недостатков (необходимость специального оборудования, нестойкость флюоресценции), пришли иммуноферментные методы, среди которых наибольшего распространения получил иммунопероксидазный метод. Использование в качестве фермента пероксидазы хрена обусловлено рядом преимуществ: фермент недорогой- его можно легко получить в высокоочищенной форме, что уменьшает возможность загрязнения- он стабилен и остается в неизмененном виде в процессе получения, хранения и использования- активность присутствующей в небольшом количестве эндогенной пероксидазы легко подавляется.
Существует четыре основных метода пероксидазного окрашивания, которые могут быть использованы для выявления клеточных антигенов: прямой, непрямой, ПАП-метод и авидин-биотиновый метод. Каждый из перечисленных методов имеет свои преимущества и недостатки, которые необходимо учитывать для наиболее эффективного его использования. Методика допускает использование криостатных срезов, мазков, отпечатков, а также обычно проведенного и заключенного в парафин материала. Последнее обстоятельство дает возможность проведения также и ретроспективных исследований. Теоретически метод может выявить любой антиген в ткани, если сохранены антигенные детерминанты и имеются специфические антитела к этому антигену. Таким образом, можно определить тип клеток, продуцирующих данный антиген в норме и опухоли, уровень этого образованного вещества, установить тип клеток неизвестного происхождения и определить направление клеточной дифференцировки.
В настоящее время иммунопероксидазным методом по наличию в клетках того или иного белка можно не только установить эпителиальную, мезенхимальную или лимфоидную природу опухоли (табл. 6), но и провести более утонченную диагностику, новообразований в пределах одной группы (табл. 7).

ТАБЛИЦА 6. Маркеры опухолей различной тканевой природы

В последнее время для повышения специфичности иммунологических реакций на тканевых срезах используют моноклональные антитела. Каждая молекула антигена содержит несколько характерных антигенных детерминант. При попадании в организм антиген вызывает выработку антител В-лимфоцитами, причем одна В-клетка может образовывать антитела только против одной детерминанты. Таким образом, антитела, вырабатываемые разными В-клетками на различные детерминанты антигена, называются поликлональными. Сейчас стало возможным получать антитела на определенную антигенную детерминанту. Так как эти антитела вырабатываются В-клетками определенной линии (названной клоном), они получили название моноклональных.
Весьма перспективным для решения задач точной дифференциальной диагностики, определения гистогенеза опухоли и выработки морфологических критериев злокачественности является сочетание методов иммуноморфологии и электронной микроскопии.

ТАБЛИЦА 7. Маркеры различных типов опухолей неэпителиальной природы